| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| abstract | 第9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| 1.1 重金属污染概述 | 第15-17页 |
| 1.1.1 重金属污染现状 | 第15-16页 |
| 1.1.2 重金属污染的危害 | 第16页 |
| 1.1.3 重金属污染的治理 | 第16-17页 |
| 1.2 植物抗重金属的研究 | 第17-21页 |
| 1.2.1 植物抗逆特性 | 第17-18页 |
| 1.2.2 重金属镉进入植物体的途径及其毒害机制 | 第18页 |
| 1.2.3 植物对重金属镉胁迫的响应机制 | 第18-21页 |
| 1.3 MNB1概述 | 第21-22页 |
| 1.4 MYB转录因子概述 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-45页 |
| 2.1 实验材料 | 第24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.2 主要试剂 | 第24-28页 |
| 2.2.1 常用分子生物学试剂盒 | 第24页 |
| 2.2.2 常用酶类 | 第24页 |
| 2.2.3 常用生化试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.4 常用溶液与试剂的配制 | 第25-28页 |
| 2.3 主要仪器与设备 | 第28-29页 |
| 2.4 实验方法 | 第29-45页 |
| 2.4.1 灭菌方法 | 第29-30页 |
| 2.4.2 拟南芥土壤培养方法 | 第30-31页 |
| 2.4.3 拟南芥培养皿培养法 | 第31页 |
| 2.4.4 Trizol法提取植物总RNA | 第31-32页 |
| 2.4.5 反转录合成cDNA | 第32-33页 |
| 2.4.6 qRT-PCR | 第33-34页 |
| 2.4.7 CTAB法提取拟南芥全基因组DNA | 第34页 |
| 2.4.8 PCR反应体系及程序 | 第34-35页 |
| 2.4.9 琼脂糖凝胶电泳 | 第35页 |
| 2.4.10 重组载体构建 | 第35-36页 |
| 2.4.11 DNA产物纯化方法 | 第36-37页 |
| 2.4.12 大肠杆菌的转化 | 第37-38页 |
| 2.4.13 电击转化农杆菌 | 第38页 |
| 2.4.14 浸花法侵染拟南芥 | 第38-39页 |
| 2.4.15 Cd含量测定 | 第39页 |
| 2.4.16 GSH、PC含量测定 | 第39-42页 |
| 2.4.17 GUS染色 | 第42-43页 |
| 2.4.18 实验中引物清单 | 第43-45页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第45-75页 |
| 3.1 基因MNB1功能缺失突变体对重金属镉胁迫的响应 | 第45-46页 |
| 3.2 MNB1基因的过量表达载体构建 | 第46-48页 |
| 3.2.1 MNB1基因的克隆 | 第46页 |
| 3.2.2 MNB1和质粒的双酶切 | 第46-47页 |
| 3.2.3 连接与转化 | 第47页 |
| 3.2.4 阳性重组质粒的PCR鉴定 | 第47页 |
| 3.2.5 过表达株系的筛选与鉴定 | 第47-48页 |
| 3.3 MNB1基因过表达株系对镉胁迫的响应 | 第48-50页 |
| 3.3.1 MNB1基因过表达植株发育表型分析 | 第48-49页 |
| 3.3.2 MNB1基因过表达植株对镉耐受 | 第49-50页 |
| 3.4 MNB1基因的表达模式 | 第50-52页 |
| 3.4.1 MNB1基因和其他物种中相似基因的同源分析 | 第50-51页 |
| 3.4.2 MNB1和其他蛋白的氨基酸序列比对 | 第51页 |
| 3.4.3 MNB1基因的组织特异性表达 | 第51页 |
| 3.4.4 MNB1基因被镉诱导表达 | 第51-52页 |
| 3.5 MNB1通过GSH依赖的PC合成途径调控镉的耐受 | 第52-56页 |
| 3.5.1 镉含量测定 | 第52-53页 |
| 3.5.2 外源BSO对MNB1过表达植株的影响 | 第53-54页 |
| 3.5.3 WT、mnb1突变体和MNB1-OE植株中GSH和PC含量测定 | 第54-55页 |
| 3.5.4 MNB1正向调控PC合成途径相关基因表达 | 第55-56页 |
| 3.6 甘露糖和MNB1的结合对于MAN3介导的镉耐受是必需的 | 第56-59页 |
| 3.7 MYB4转录因子能激活MAN3的表达 | 第59-60页 |
| 3.8 myb4突变体对重金属镉胁迫的响应 | 第60-61页 |
| 3.9 MYB4基因的过量表达载体构建 | 第61-63页 |
| 3.9.1 MYB4基因的克隆 | 第61页 |
| 3.9.2 MYB4和质粒的双酶切 | 第61页 |
| 3.9.3 连接与转化 | 第61-62页 |
| 3.9.4 阳性重组质粒的PCR鉴定 | 第62页 |
| 3.9.5 过表达株系的筛选与鉴定 | 第62-63页 |
| 3.10 MYB4基因过表达株系对镉胁迫的响应 | 第63-65页 |
| 3.10.1 MYB4基因过表达植株发育表型分析 | 第63-64页 |
| 3.10.2 MYB4基因过表达植株对镉耐受 | 第64-65页 |
| 3.11 MYB4基因的表达模式 | 第65-67页 |
| 3.11.1 MYB4的亚细胞定位 | 第65页 |
| 3.11.2 MYB4基因和其他物种中相似基因的同源分析 | 第65-66页 |
| 3.11.3 MYB4和其他蛋白的氨基酸序列比对 | 第66页 |
| 3.11.4 MYB4基因的组织特异性表达 | 第66页 |
| 3.11.5 MYB4基因被镉诱导表达 | 第66-67页 |
| 3.12 MYB4通过GSH依赖的PC合成途径调控镉的耐受 | 第67-71页 |
| 3.12.1 镉含量测定 | 第67-68页 |
| 3.12.2 外源BSO对MYB4过表达植株的影响 | 第68-69页 |
| 3.12.3 myb4突变体和过表达植株中GSH和PC含量测定 | 第69-70页 |
| 3.12.4 MYB4正向调控PC合成途径相关基因表达 | 第70-71页 |
| 3.13 在GSH途径中MYB4作用于MAN3的上游来调控镉的耐受 | 第71-73页 |
| 3.13.1 双突变体表型分析 | 第71-72页 |
| 3.13.2 外源甘露糖恢复myb4突变体表型 | 第72-73页 |
| 3.14 MAN3-Mannose-MNB1参与到MYB4介导镉耐受的调控 | 第73-75页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第86-87页 |
