| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略表 | 第16-17页 |
| 实验用质粒、菌种及细胞 | 第17-18页 |
| 实验仪器和设备 | 第18-19页 |
| 实验试剂耗材 | 第19-22页 |
| 试剂配方 | 第22-24页 |
| 第一章 绪论 | 第24-31页 |
| 1.1 胆管癌 | 第24页 |
| 1.2 LOXL2、SNAIL和SUMOylation概述 | 第24-26页 |
| 1.2.1 LOXL2蛋白 | 第24-25页 |
| 1.2.2 SNAIL蛋白 | 第25页 |
| 1.2.3 SUMOylation | 第25-26页 |
| 1.3 前期工作及研究意义 | 第26页 |
| 1.4 实验方案与技术路线 | 第26-31页 |
| 1.4.1 质粒扩增实验 | 第27-28页 |
| 1.4.2 瞬时转染实验 | 第28页 |
| 1.4.3 CO-IP检测LOXL2、SNAIL和SUMO的结合情况 | 第28-29页 |
| 1.4.4 Westernblot检测蛋白表达情况 | 第29页 |
| 1.4.5 IF检测蛋白表达情况 | 第29-31页 |
| 第二章 LOXL2正性调控SNAIL蛋白的表达 | 第31-48页 |
| 2.1 实验内容 | 第31-44页 |
| 2.1.1 实验材料和仪器 | 第31-34页 |
| 2.1.1.1 实验材料 | 第31页 |
| 2.1.1.2 实验试剂耗材 | 第31-33页 |
| 2.1.1.3 仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 2.1.2.1 细胞复苏 | 第34-35页 |
| 2.1.2.2 细胞传代 | 第35-36页 |
| 2.1.2.3 细胞冻存 | 第36页 |
| 2.1.2.4 细胞计数 | 第36-37页 |
| 2.1.3 质粒扩增实验 | 第37-39页 |
| 2.1.3.1 转化实验 | 第37-38页 |
| 2.1.3.2 摇菌扩大培养 | 第38页 |
| 2.1.3.3 提取质粒 | 第38-39页 |
| 2.1.4 转染实验 | 第39页 |
| 2.1.5 IF实验 | 第39-40页 |
| 2.1.6 westernblot实验 | 第40-44页 |
| 2.1.6.1 总蛋白提取 | 第40-41页 |
| 2.1.6.2 BCA法总蛋白质定量 | 第41-42页 |
| 2.1.6.3 SDS-PEGA聚丙烯凝胶电泳 | 第42-44页 |
| 2.2 实验结果 | 第44-47页 |
| 2.2.1 质粒扩增结果 | 第44页 |
| 2.2.2 验证转染结果 | 第44-45页 |
| 2.2.3 IF实验检测EX-LOXL2情况下,LOXL2正性调控SNAIL蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 2.2.4 westernblot检测EX-LOXL2情况下,LOXL2正性调控SNAIL蛋白的表达 | 第46-47页 |
| 2.3 小结 | 第47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-48页 |
| 第三章 LOXL2介导SNAIL苏素化的研究 | 第48-57页 |
| 3.1 实验内容 | 第48-53页 |
| 3.1.1 实验材料和仪器 | 第48-51页 |
| 3.1.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.1.1.2 实验试剂耗材 | 第48-51页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第51-52页 |
| 3.1.2.1 细胞复苏 | 第51页 |
| 3.1.2.2 细胞传代 | 第51页 |
| 3.1.2.3 细胞冻存 | 第51-52页 |
| 3.1.2.4 细胞计数 | 第52页 |
| 3.1.3 质粒扩增实验 | 第52页 |
| 3.1.3.1 转化实验 | 第52页 |
| 3.1.3.2 扩大培养菌 | 第52页 |
| 3.1.3.3 提取质粒 | 第52页 |
| 3.1.4 双转染实验 | 第52页 |
| 3.1.5 CO-IP实验 | 第52-53页 |
| 3.1.5.1 提蛋白 | 第53页 |
| 3.1.5.2 CO-IP实验 | 第53页 |
| 3.1.6 IF实验 | 第53页 |
| 3.1.7 westernblot实验 | 第53页 |
| 3.2 实验结果 | 第53-56页 |
| 3.2.1 CO-IP检测EX-LOXL2情况下,SNAIL与SUMO2/3结合 | 第53-54页 |
| 3.2.2 IF检测EX-LOXL2-EX-SENP情况下,LOXL2和SNAIL的表达量 | 第54-55页 |
| 3.2.3 westernblot检测EX-LOXL2-Si-SUMO情况下,LOXL2和SNAIL的表达量 | 第55-56页 |
| 3.3 小结 | 第56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-57页 |
| 第四章 LOXL2调控SNAIL的位点的研究 | 第57-68页 |
| 4.1 实验内容 | 第57-65页 |
| 4.1.1 实验材料、试剂和仪器 | 第57-60页 |
| 4.1.1.1 实验材料 | 第57页 |
| 4.1.1.2 实验试剂耗材 | 第57-60页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第60页 |
| 4.1.2.1 细胞复苏 | 第60页 |
| 4.1.2.2 细胞传代 | 第60页 |
| 4.1.2.3 细胞冻存 | 第60页 |
| 4.1.2.4 细胞计数 | 第60页 |
| 4.1.3 质粒扩增实验 | 第60-61页 |
| 4.1.3.1 转化实验 | 第60-61页 |
| 4.1.3.2 扩大培养菌 | 第61页 |
| 4.1.3.3 提取质粒 | 第61页 |
| 4.1.4 双转染实验 | 第61-62页 |
| 4.1.5 westernblot实验 | 第62-65页 |
| 4.1.5.1 总蛋白提取 | 第62页 |
| 4.1.5.2 BCA法总蛋白质定量 | 第62-63页 |
| 4.1.5.3 SDS-PEGA聚丙烯凝胶电泳 | 第63-65页 |
| 4.2 实验结果 | 第65-66页 |
| 4.2.1 western blot检测SNAIL位点单突变情况下,LOXL2和SNAIL的表达量 | 第65-66页 |
| 4.2.2 western blot检测SNAIL位点双突变情况下,LOXL2和SNAIL的表达量 | 第66页 |
| 4.3 小结 | 第66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 讨论 | 第68-69页 |
| 第六章 SUMO与肿瘤的研究进展 | 第69-80页 |
| 参考文献 | 第80-96页 |
| 附录A 硕士期间发表论文 | 第96-104页 |
| 附录B 硕士期间参与研究和撰写的项目 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
