| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-24页 |
| 1.1 脂肪酶简介 | 第12-20页 |
| 1.1.1 脂肪酶的定义 | 第12页 |
| 1.1.2 脂肪酶的来源 | 第12-13页 |
| 1.1.3 脂肪酶的应用 | 第13页 |
| 1.1.4 脂肪酶的结构特征 | 第13-17页 |
| 1.1.5 脂肪酶的底物选择性 | 第17-18页 |
| 1.1.6 脂肪酶的分子改造 | 第18-20页 |
| 1.2 球形马拉色菌脂肪酶SMG1 简介 | 第20-22页 |
| 1.2.1 马拉色菌 | 第20页 |
| 1.2.2 球形马拉色菌脂肪酶SMG1 | 第20-22页 |
| 1.3 研究背景及研究意义 | 第22页 |
| 1.4 研究内容和技术路线 | 第22-24页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 SMG1 突变体表达载体的构建及表达纯化 | 第24-39页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第24-27页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第24-25页 |
| 2.2.2 试剂 | 第25页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2.4 培养基的配制 | 第25-26页 |
| 2.2.5 缓冲液的配制 | 第26-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.3.1 突变位点选取 | 第27-28页 |
| 2.3.2 引物设计 | 第28页 |
| 2.3.3 构建带有his标签的SMG1 表达载体pGAPZαA-SMG1(his) | 第28-31页 |
| 2.3.4 突变体表达载体构建 | 第31-32页 |
| 2.3.5 野生型及突变体毕赤酵母X-33 重组表达菌株的获取 | 第32-33页 |
| 2.3.6 野生型及突变体的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-38页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第34-35页 |
| 2.4.2 带his标签的野生型表达载体pGAPZαA-SMG1(his)的构建 | 第35-36页 |
| 2.4.3 SMG1（his）毕赤酵母X-33 重组表达菌株的筛选以及目的蛋白纯化 | 第36页 |
| 2.4.4 突变体表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.4.5 突变体毕赤酵母表达菌株的筛选 | 第37页 |
| 2.4.6 野生型及突变体的表达与纯化 | 第37-38页 |
| 2.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 SMG1 野生型及突变体酶学性质的测定和分析 | 第39-59页 |
| 3.1 引言 | 第39-40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.2.1 试剂 | 第40页 |
| 3.2.2 缓冲液和底物的配制 | 第40页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.3 实验方法 | 第41-43页 |
| 3.3.1 不同pH条件下对硝基苯酚标准曲线的绘制 | 第41页 |
| 3.3.2 野生型SMG1 水解对硝基苯酚丁酸酯（PNPB）界面催化特性分析 | 第41页 |
| 3.3.3 最适pH的测定 | 第41-42页 |
| 3.3.4 最适温度的测定 | 第42页 |
| 3.3.5 最适人工底物的测定 | 第42页 |
| 3.3.6 野生型和突变体对人工底物对硝基苯酚酯的比酶活及水解动力学参数的测定 | 第42页 |
| 3.3.7 野生型和突变体对天然底物DAG水解活力的测定 | 第42-43页 |
| 3.3.8 对TAG, DAG, MAG水解能力的测定 | 第43页 |
| 3.3.9 Asn277 位点突变体的圆二色谱分析 | 第43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-57页 |
| 3.4.1 不同pH条件下的对硝基苯酚标准曲线 | 第43-45页 |
| 3.4.2 SMG1 水解PNPB的界面催化特性分析 | 第45页 |
| 3.4.3 pH对野生型及突变体活力的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.4 温度对野生型及突变体酶活力的影响 | 第46-48页 |
| 3.4.5 野生型和突变体最适底物的测定 | 第48页 |
| 3.4.6 动力学参数的确定 | 第48-51页 |
| 3.4.7 野生型和突变体对人工底物和天然甘油二酯的水解活力测定 | 第51-52页 |
| 3.4.8 野生型和突变体对TAG，DAG，MAG水解能力的测定 | 第52-56页 |
| 3.4.9 N277 突变体圆二色谱扫描结果 | 第56-57页 |
| 3.5 本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 脂肪酶SMG1 的结构分析 | 第59-67页 |
| 4.1 引言 | 第59页 |
| 4.2 SMG1 的界面催化特性与盖子结构的关系 | 第59-61页 |
| 4.3 Phe278 与底物选择性的关系 | 第61-63页 |
| 4.4 Leu103 和Phe104 的锚定作用 | 第63-64页 |
| 4.5 Asn277 突变体的DS模拟分析 | 第64-66页 |
| 4.6 本章小结 | 第66-67页 |
| 结论与展望 | 第67-69页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 创新点 | 第68页 |
| 展望 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附件 | 第77页 |
