| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 中英文对照及缩写 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 神经母细胞瘤 | 第11-14页 |
| 1.1.1 神经母细胞瘤概况 | 第11页 |
| 1.1.2 神经母细胞瘤的靶向治疗靶标 | 第11-14页 |
| 1.2 Trk | 第14-19页 |
| 1.2.1 Trk概况 | 第14-16页 |
| 1.2.2 Trk下游信号通路 | 第16-17页 |
| 1.2.3 Trk与肿瘤 | 第17-19页 |
| 1.3 Trk可作为神经母细胞瘤的治疗靶标 | 第19-21页 |
| 1.4 Trk抑制剂研究现状 | 第21-22页 |
| 1.5 立题依据 | 第22-23页 |
| 第二章 SH-SY5Y-TrkB稳定株的构建 | 第23-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 主要实验耗材和仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.3 细胞系 | 第24页 |
| 2.1.4 主要实验试剂和溶液的配制 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-33页 |
| 2.2.1 因子储备液的配制与保存 | 第25页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第25-26页 |
| 2.2.3 大肠杆菌的培养 | 第26-27页 |
| 2.2.4 大肠杆菌质粒的提取 | 第27页 |
| 2.2.5 嘌呤霉素最佳筛选浓度的确定 | 第27页 |
| 2.2.6 pRP-TrkB质粒转染 | 第27-28页 |
| 2.2.7 稳定株的鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.8 WesternBlot法检测BDNF对TrkB及其下游信号通路的作用 | 第30-31页 |
| 2.2.9 CCK-8法检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞增殖的影响 | 第31页 |
| 2.2.10 克隆形成实验检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞克隆形成的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.11 Transwell实验检测BDNF对SH-SY5Y及SH-SY5Y-TrkB细胞迁移能力的影响 | 第32页 |
| 2.2.12 WesternBlot法检测BDNF对侵袭迁移相关蛋白表达的影响 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第33-41页 |
| 2.3.1 TrkB在SH-SY5Y-TrkB细胞中mRNA水平高表达 | 第33页 |
| 2.3.2 TrkB在SH-SY5Y-TrkB细胞中蛋白水平高表达 | 第33-34页 |
| 2.3.3 BDNF激活TrkB及其下游信号通路 | 第34-37页 |
| 2.3.4 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞增殖 | 第37-38页 |
| 2.3.5 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞克隆形成 | 第38-39页 |
| 2.3.6 TrkB的激活促进神经母细胞瘤细胞侵袭和迁移 | 第39-40页 |
| 2.3.7 BDNF上调MMP2/MMP9的表达 | 第40-41页 |
| 2.4 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 GZD2202体外活性研究 | 第43-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第43-44页 |
| 3.1.1 主要实验仪器 | 第43页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第43-44页 |
| 3.1.3 细胞系 | 第44页 |
| 3.1.4 药物 | 第44页 |
| 3.2 实验方法 | 第44-49页 |
| 3.2.1 化合物及因子储备液的配制与保存 | 第44页 |
| 3.2.2 细胞培养 | 第44页 |
| 3.2.3 激酶活性测试(Z’-LYTETMkinaseassay) | 第44-47页 |
| 3.2.4 CCK-8法检测受试化合物抗增殖活性 | 第47页 |
| 3.2.5 Wound healing实验检测GZD2202对BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞迁移能力的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.6 Transwell实验检测GZD2202对BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞侵袭能力的影响 | 第48-49页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第49-54页 |
| 3.3.1 GZD2202是一个新骨架Trk抑制剂 | 第49-50页 |
| 3.3.2 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞增殖 | 第50-52页 |
| 3.3.3 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞克隆形成 | 第52页 |
| 3.3.4 GZD2202抑制BDNF诱导的SH-SY5Y-TrkB细胞的侵袭和迁移 | 第52-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 GZD2202体外抗肿瘤作用机制研究 | 第55-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 主要实验仪器 | 第55页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第55-56页 |
| 4.1.3 抗体 | 第56页 |
| 4.1.4 细胞系 | 第56页 |
| 4.1.5 药物 | 第56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-57页 |
| 4.2.1 WesternBlot实验检测GZD2202对TrkB信号通路相关蛋白表达的影响 | 第56-57页 |
| 4.2.2 WesternBlot实验检测GZD2202对SH-SY5Y-TrkB细胞中迁移侵袭相关蛋白表达的影响 | 第57页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第57-61页 |
| 4.3.1 GZD2202抑制BDNF诱导的TrkB及其下游信号通路的活化 | 第57-59页 |
| 4.3.2 GZD2202抑制BDNF诱导的MMP2/MMP9的表达 | 第59-61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 GZD2202体内抗SH-SY5Y-TrkB小鼠移植瘤活性及其机制研究 | 第62-67页 |
| 5.1 实验材料 | 第62页 |
| 5.1.1 动物 | 第62页 |
| 5.1.2 药物 | 第62页 |
| 5.1.3 细胞系 | 第62页 |
| 5.1.4 主要仪器、实验器材及实验试剂 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 D2202的准备 | 第62页 |
| 5.2.2 SH-SY5Y-TrkB小鼠体内移植瘤模型的建立 | 第62-63页 |
| 5.2.3 动物分组及给药 | 第63页 |
| 5.2.4 TUNEL法观察GZD2202对各荷瘤鼠肿瘤组织细胞凋亡的影响 | 第63-64页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第64-66页 |
| 5.3.1 GZD2202抑制SH-SY5Y-TrkB小鼠体内移植瘤的生长 | 第64-66页 |
| 5.3.2 GZD2202促进肿瘤组织细胞发生凋亡 | 第66页 |
| 5.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 第六章 全文总结 | 第67-69页 |
| 6.1 主要结论 | 第67页 |
| 6.2 创新之处 | 第67页 |
| 6.3 展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 在校期间撰写及发表的论文 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
