| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第12-17页 |
| 1.1 植物细胞色素P450研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 细胞色素P450基因家族的起源与分类 | 第12页 |
| 1.1.2 植物细胞色素P450的结构特点 | 第12-13页 |
| 1.1.3 植物细胞色素P450的分布 | 第13页 |
| 1.1.4 植物细胞色素P450基因的功能研究 | 第13-15页 |
| 1.2 苜蓿中细胞色素P450的研究概述 | 第15-16页 |
| 1.3 本研究目的意义 | 第16-17页 |
| 第二章 MtCYP450的克隆及生物信息学分析 | 第17-27页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-20页 |
| 2.2.1 R108生态型蒺藜苜蓿的培养 | 第17页 |
| 2.2.2 植物基因组DNA的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.3 MtCYP450基因的克隆 | 第18页 |
| 2.2.4 PCR产物的回收 | 第18-19页 |
| 2.2.5 连接克隆载体及转化大肠杆菌 | 第19-20页 |
| 2.2.6 生物信息学分析 | 第20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-26页 |
| 2.3.1 目的基因的克隆 | 第20页 |
| 2.3.2 生物信息学分析 | 第20-24页 |
| 2.3.3 启动子顺式作用元件预测分析 | 第24-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 MtCYP450的表达特性分析 | 第27-37页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第27页 |
| 3.2 实验方法 | 第27-32页 |
| 3.2.1 MtCYP450基因在苜蓿中的表达模式分析 | 第27-29页 |
| 3.2.2 原核表达分析 | 第29-32页 |
| 3.3 结果分析 | 第32-35页 |
| 3.3.1 组织差异性表达分析 | 第32-33页 |
| 3.3.2 不同诱导条件下的表达分析 | 第33-34页 |
| 3.3.3 原核表达分析 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 MtCYP450对拟南芥的遗传转化 | 第37-45页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第37页 |
| 4.1.1 实验材料与试剂 | 第37页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第37页 |
| 4.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 4.2.1 超表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 4.2.2 农杆菌EHA105的转化和鉴定 | 第38页 |
| 4.2.3 对拟南芥的遗传转化 | 第38-39页 |
| 4.2.4 转基因拟南芥的阳性鉴定 | 第39页 |
| 4.2.5 转基因拟南芥中MtCYP450的表达分析 | 第39页 |
| 4.2.6 转基因拟南芥的抗逆性分析 | 第39页 |
| 4.3 结果分析 | 第39-44页 |
| 4.3.1 超表达载体的构建及鉴定 | 第39-40页 |
| 4.3.2 转基因拟南芥鉴定 | 第40-41页 |
| 4.3.3 转基因拟南芥中MtCYP450基因的表达分析 | 第41-42页 |
| 4.3.4 转基因拟南芥的抗逆性分析 | 第42-44页 |
| 4.4 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 MtCYP450对蒺藜苜蓿的遗传转化 | 第45-54页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第45页 |
| 5.1.1 实验材料与试剂 | 第45页 |
| 5.1.2 实验仪器 | 第45页 |
| 5.2 实验方法 | 第45-49页 |
| 5.2.1 超表达载体的构建 | 第45页 |
| 5.2.2 CRISPR/Cas9介导的基因敲除载体的构建 | 第45-47页 |
| 5.2.3 蒺藜苜蓿的遗传转化 | 第47-49页 |
| 5.2.4 转基因株系的阳性鉴定 | 第49页 |
| 5.3 结果分析 | 第49-53页 |
| 5.3.1 转基因蒺藜苜蓿的获得及鉴定 | 第49-50页 |
| 5.3.2 超表达转基因植株的鉴定 | 第50-51页 |
| 5.3.3 CRISPR/Cas9介导的基因敲出载体转基因的鉴定 | 第51-53页 |
| 5.4 讨论 | 第53-54页 |
| 第六章 全文总结 | 第54-55页 |
| 6.1 结论 | 第54页 |
| 6.2 后续工作及展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简历 | 第63页 |
