| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-23页 |
| 1.1 布鲁氏菌概述 | 第14-18页 |
| 1.1.1 布鲁氏菌生物学特性 | 第14页 |
| 1.1.2 布鲁氏菌流行病学 | 第14-15页 |
| 1.1.3 布鲁氏菌病诊断 | 第15-16页 |
| 1.1.4 布鲁氏菌病防治 | 第16-17页 |
| 1.1.5 布鲁氏菌致病机制与宿主免疫反应 | 第17-18页 |
| 1.2 miRNA概述 | 第18-21页 |
| 1.2.1 miRNA起源及生物合成过程 | 第18-19页 |
| 1.2.2 miRNA作用机制及调控功能 | 第19-20页 |
| 1.2.3 miRNA与细菌感染 | 第20-21页 |
| 1.2.4 miRNA与胞内菌诱导的细胞凋亡 | 第21页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 筛选对布鲁氏菌胞内复制水平影响或参与细胞凋亡的miRNAs | 第23-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 细胞与菌株 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 RAW264.7细胞的复苏和培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2 布鲁氏菌的冻存和滴定 | 第24页 |
| 2.2.3 巨噬细胞RAW264.7转染miRNAmimic/inhibitor | 第24页 |
| 2.2.4 布鲁氏菌感染RAW264.7细胞 | 第24页 |
| 2.2.5 胞内菌M5-90和M28进行计数 | 第24-25页 |
| 2.3 miRNAs筛选结果 | 第25-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 miRNA-363-5p的靶基因验证 | 第28-40页 |
| 3.1 双荧光素酶报告系统验证miRNA-363-5p与靶基因作用 | 第28-34页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第28页 |
| 3.1.2 RAW264.7细胞总RNA提取和反转录 | 第28-29页 |
| 3.1.3 miRNA-363-5p靶基因双荧光素酶报告质粒的构建 | 第29-31页 |
| 3.1.4 miRNA-363-5p靶基因双荧光素酶报告质粒的鉴定 | 第31页 |
| 3.1.5 中提miRNA-363-5p靶基因双荧光素酶报告质粒 | 第31-32页 |
| 3.1.6 含靶基因3’UTR质粒和miRNA-363-5pmimic共转染细胞 | 第32页 |
| 3.1.7 检测海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶荧光值 | 第32-33页 |
| 3.1.8 miRNA-363-5p靶基因验证结果 | 第33-34页 |
| 3.2 Western-blot验证miRNA-363-5p与靶基因作用 | 第34-38页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.2.2 巨噬细胞蛋白样品制备 | 第34页 |
| 3.2.3 巨噬细胞蛋白样品电泳 | 第34-35页 |
| 3.2.4 巨噬细胞蛋白样品转膜 | 第35-36页 |
| 3.2.5 封闭与抗体孵育 | 第36-37页 |
| 3.2.6 靶蛋白检测和含量分析 | 第37页 |
| 3.2.7 Western-blot验证miRNA-363-5p靶基因结果 | 第37-38页 |
| 3.3 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 miRNA-363-5p对小鼠体内布鲁氏菌复制影响 | 第40-43页 |
| 4.1 实验材料 | 第40页 |
| 4.2 主要仪器 | 第40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-41页 |
| 4.3.1 小鼠尾静脉注射体内microRNA模拟物和抑制物 | 第40-41页 |
| 4.3.2 小鼠脾脏内布鲁氏菌分离计数 | 第41页 |
| 4.4 miRNA-363-5p对小鼠体内布鲁氏菌感染复制作用结果 | 第41页 |
| 4.5 讨论 | 第41-43页 |
| 第五章 马耳他布鲁氏菌ΔOmpR的构建及其对生长与复制的影响 | 第43-52页 |
| 5.1 实验材料 | 第43页 |
| 5.1.1 菌株、实验动物及细胞系 | 第43页 |
| 5.1.2 质粒和主要试剂 | 第43页 |
| 5.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 5.2.1 自杀质粒pSP-OmpR-K的构建 | 第43-44页 |
| 5.2.2 缺失株M28ΔOmpR和回补株M28ΔOmpR-com的筛选鉴定 | 第44页 |
| 5.2.3 菌落生长差异比较 | 第44页 |
| 5.2.4 生长曲线测定 | 第44-45页 |
| 5.2.5 RAW264.7巨噬细胞感染实验 | 第45页 |
| 5.2.6 小鼠感染实验 | 第45页 |
| 5.3 实验结果 | 第45-50页 |
| 5.3.1 pSP-OmpR-K重组自杀载体构建及鉴定 | 第45-46页 |
| 5.3.2 缺失株M28ΔOmpR和回补株M28ΔOmpR-com的筛选鉴定 | 第46页 |
| 5.3.3 菌落生长差异比较 | 第46-48页 |
| 5.3.4 细菌生长曲线测定 | 第48-49页 |
| 5.3.5 巨噬细胞感染实验 | 第49页 |
| 5.3.6 小鼠体内感染实验 | 第49-50页 |
| 5.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第六章 全文结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |
