| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-27页 |
| 1.1 β-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.1.1 纤维素的酶解 | 第16-17页 |
| 1.1.2 β-葡萄糖苷酶的定义分类 | 第17-19页 |
| 1.1.3 β-葡萄糖苷酶的表达纯化 | 第19页 |
| 1.1.4 β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第19-20页 |
| 1.2 酶蛋白的糖基化 | 第20-24页 |
| 1.2.1 糖基化概述 | 第20-21页 |
| 1.2.2 糖基化类型 | 第21-22页 |
| 1.2.3 糖基化研究进展 | 第22-24页 |
| 1.2.3.1 真核生物的糖基化研究 | 第22页 |
| 1.2.3.2 原核生物的糖基化研究 | 第22-24页 |
| 1.3 β-葡萄糖苷酶的糖基化研究 | 第24页 |
| 1.4 β-葡萄糖苷酶的工业应用 | 第24-25页 |
| 1.5 本研究意义和主要研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 嗜热真菌篮状菌(T.leycettanusJCM12802)β-葡萄糖苷酶Bgl3A不同表达系统的比较 | 第27-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 菌株 | 第27页 |
| 2.1.2 实验仪器、商业酶、试剂盒及其它生化试剂 | 第27页 |
| 2.1.3 培养基及溶剂配制 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 β-葡萄糖苷酶Bgl3A的不同表达系统选择 | 第28-29页 |
| 2.2.2 β-葡萄糖苷酶Bgl3A在不同系统的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.2.2.1 在篮状菌中的诱导表达 | 第29页 |
| 2.2.2.2 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第29页 |
| 2.2.2.3 在毕赤酵母中的诱导表达 | 第29页 |
| 2.2.2.4 在腐质霉中的诱导表达 | 第29-30页 |
| 2.2.3 β-葡萄糖苷酶Bgl3A不同系统表达酶液的纯化及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.3.1 篮状菌诱导酶液Bgl3A的纯化 | 第30页 |
| 2.2.3.2 大肠杆菌诱导酶液Bgl3A的纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.3.3 毕赤酵母诱导酶液Bgl3A的纯化 | 第31页 |
| 2.2.3.4 腐质霉诱导酶液Bgl3A的纯化 | 第31页 |
| 2.2.3.5 β-葡萄糖苷酶Bgl3A的鉴定 | 第31页 |
| 2.2.4 β-葡萄糖苷酶Bgl3A不同系统表达酶学性质测定 | 第31-33页 |
| 2.2.4.1 活性的测定方法 | 第31-32页 |
| 2.2.4.2 蛋白浓度的测定方法 | 第32页 |
| 2.2.4.3 最适pH、温度和pH稳定性 | 第32页 |
| 2.2.4.4 底物特异性测定方法 | 第32-33页 |
| 2.2.4.5 动力学参数的测定方法 | 第33页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第33-38页 |
| 2.3.1 β-葡萄糖苷酶Bgl3A不同系统的表达和纯化 | 第33-35页 |
| 2.3.1.1 不同系统表达Bgl3A的SDS-PAGE鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.1.2 篮状菌原酶纯化Bgl3A的质谱鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 蛋白浓度的标准曲线 | 第35页 |
| 2.3.3 最适条件和稳定性分析 | 第35-36页 |
| 2.3.4 底物特异性分析 | 第36-37页 |
| 2.3.5 动力学参数分析 | 第37-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-39页 |
| 2.4.1 不同系统表达Bgl3A蛋白分子量差异分析 | 第38-39页 |
| 2.4.2 不同系统表达Bgl3A酶学性质差异比较 | 第39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 第三章 嗜热真菌篮状菌(T.leycettanusJCM12802)β-葡萄糖苷酶Bgl3A毕赤酵母表达N-糖基化修饰研究 | 第40-52页 |
| 3.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第40页 |
| 3.1.2 主要试剂以及培养基配置 | 第40页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-45页 |
| 3.2.1 bgl3A序列N-糖基化程度分析 | 第40页 |
| 3.2.2 N-糖基化突变体设计 | 第40-44页 |
| 3.2.2.1 突变载体的构建 | 第40-42页 |
| 3.2.2.2 毕赤酵母重组菌株的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.2.3 重组β-葡萄糖苷酶的诱导表达纯化及鉴定 | 第43-44页 |
| 3.2.3 N-糖基化突变体酶学性质分析 | 第44-45页 |
| 3.2.3.1 活性的测定方法 | 第44页 |
| 3.2.3.2 蛋白浓度测定方法 | 第44页 |
| 3.2.3.3 最适pH和温度的测定 | 第44页 |
| 3.2.3.4 温度稳定性的测定 | 第44-45页 |
| 3.2.3.5 动力学常数的测定 | 第45页 |
| 3.2.3.6 Bgl3A同源建模与纤维二糖底物对接 | 第45页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第45-50页 |
| 3.3.1 bgl3A序列N-糖基化程度分析 | 第45-46页 |
| 3.3.2 毕赤酵母表达N-糖基化突变体的纯化 | 第46-47页 |
| 3.3.3 N-糖基化突变体酶学性质分析 | 第47-50页 |
| 3.3.3.1 最适pH、最适温度比较 | 第47页 |
| 3.3.3.2 热力学、动力学稳定性比较 | 第47-48页 |
| 3.3.3.3 动力学参数比较 | 第48-49页 |
| 3.3.3.4 生物信息学分析N-糖基化位点 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50-51页 |
| 3.4.1 N-糖基化影响蛋白表达及分泌 | 第50页 |
| 3.4.2 N-糖基化影响酶热稳定性 | 第50页 |
| 3.4.3 N-糖基化影响催化效率 | 第50-51页 |
| 3.5 小结 | 第51-52页 |
| 第四章 嗜热真菌篮状菌(T.leycettanusJCM12802)β-葡萄糖苷酶Bgl3A毕赤酵母表达O-糖基化修饰研究 | 第52-60页 |
| 4.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第52页 |
| 4.1.2 主要试剂以及培养基配置 | 第52页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.2.1 bgl3A序列O-糖基化程度分析 | 第52页 |
| 4.2.2 O-糖基化突变体构建 | 第52-53页 |
| 4.2.2.1 突变载体的构建 | 第52-53页 |
| 4.2.2.2 毕赤酵母重组菌株的构建 | 第53页 |
| 4.2.2.3 重组β-葡萄糖苷酶的诱导表达纯化及鉴定 | 第53页 |
| 4.2.3 O-糖基化突变体酶学性质分析 | 第53-54页 |
| 4.2.3.1 最适条件和pH稳定性测定 | 第53页 |
| 4.2.3.2 蛋白浓度测定方法 | 第53页 |
| 4.2.3.3 动力学常数的测定 | 第53-54页 |
| 4.2.4 生物信息学分析O-糖基化位点 | 第54页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第54-57页 |
| 4.3.1 O-糖基化突变体的纯化SDS-PAGE鉴定 | 第54-55页 |
| 4.3.2 最适条件和pH稳定性分析 | 第55页 |
| 4.3.3 动力学参数分析 | 第55-56页 |
| 4.3.4 生物信息学分析O-糖基化位点 | 第56-57页 |
| 4.4 讨论 | 第57-59页 |
| 4.4.1 O-糖基化对酶的pH稳定性有显著影响 | 第58页 |
| 4.4.2 O-糖基化对酶的催化效率有一定影响 | 第58-59页 |
| 4.5 小结 | 第59-60页 |
| 第五章 全文结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67页 |
