| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 选题依据 | 第12页 |
| 1.2 对羟基苯甲酸的合成现状 | 第12-13页 |
| 1.3 微泡菌Microbulbifersp.A4B?17菌株 | 第13-16页 |
| 1.4 DAHP合酶 | 第16页 |
| 1.5 蛋白的表达与纯化 | 第16-17页 |
| 1.6 研究内容及意义 | 第17-19页 |
| 1.7 基因分析 | 第19-20页 |
| 第二章 DAHP合酶基因GM002069的克隆与表达 | 第20-56页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第20-27页 |
| 2.1.1 使用菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第21页 |
| 2.1.4 质粒提取试剂 | 第21页 |
| 2.1.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.6 其他试剂 | 第22页 |
| 2.1.7 PCR反应体系与条件 | 第22-23页 |
| 2.1.8 核酸琼脂糖凝胶电泳 | 第23页 |
| 2.1.9 质粒的提取 | 第23-24页 |
| 2.1.10 感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.1.11 质粒载体的酶切体系 | 第24-25页 |
| 2.1.12 粗酶的提取 | 第25页 |
| 2.1.13 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第25-26页 |
| 2.1.14 层析 | 第26-27页 |
| 2.2 表达质粒pColdI-GM002069结果 | 第27-37页 |
| 2.2.1 目的基因的克隆 | 第27-30页 |
| 2.2.2 基因表达 | 第30-31页 |
| 2.2.3 蛋白定量 | 第31-32页 |
| 2.2.4 蛋白纯化 | 第32页 |
| 2.2.5 硫代巴比妥酸法酶活测定 | 第32-37页 |
| 2.3 表达质粒pColdIV-GM002069结果与讨论 | 第37-45页 |
| 2.3.1 目的基因的克隆 | 第38-40页 |
| 2.3.2 基因表达 | 第40-41页 |
| 2.3.3 高效液相色谱法I酶活验证 | 第41-42页 |
| 2.3.4 不同条件下的酶活曲线 | 第42-45页 |
| 2.4 表达质粒pET-21a(+)-GM002069结果与讨论 | 第45-56页 |
| 2.4.1 目的基因的克隆 | 第46-50页 |
| 2.4.2 基因表达 | 第50页 |
| 2.4.3 高效液相色谱法II酶活验证 | 第50-53页 |
| 2.4.4 反馈调控 | 第53-54页 |
| 2.4.5 本章小结 | 第54-56页 |
| 第三章 DAHP合酶基因GM001679的克隆与表达 | 第56-86页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第56-60页 |
| 3.1.1 使用菌株 | 第56页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第56页 |
| 3.1.3 PCR反应体系与条件 | 第56-57页 |
| 3.1.4 质粒的提取 | 第57-58页 |
| 3.1.5 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第58页 |
| 3.1.6 蛋白含量测定 | 第58-59页 |
| 3.1.7 DAHP合酶活性测定 | 第59页 |
| 3.1.8 高效液相色谱的使用 | 第59-60页 |
| 3.2 表达质粒pColdI-GM001679结果与讨论 | 第60-68页 |
| 3.2.1 目的基因的克隆 | 第60-63页 |
| 3.2.2 基因表达 | 第63-64页 |
| 3.2.3 蛋白定量 | 第64-65页 |
| 3.2.4 硫代巴比妥酸法酶活测定 | 第65-68页 |
| 3.3 表达质粒pColdIV-GM001679结果与讨论 | 第68-76页 |
| 3.3.1 目的基因的克隆 | 第68-71页 |
| 3.3.2 基因表达 | 第71-72页 |
| 3.3.3 高效液相色谱法I酶活测定 | 第72-73页 |
| 3.3.4 不同条件下的酶活曲线 | 第73-75页 |
| 3.3.5 反馈调控 | 第75-76页 |
| 3.4 表达质粒pET-21a(+)-GM001679结果与讨论 | 第76-86页 |
| 3.4.1 目的基因的克隆 | 第76-80页 |
| 3.4.2 基因表达 | 第80-81页 |
| 3.4.3 酶活验证 | 第81-84页 |
| 3.4.4 反馈调控 | 第84-85页 |
| 3.4.5 本章小结 | 第85-86页 |
| 第四章 GM001835基因DAHP合酶的克隆与表达 | 第86-102页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第86-90页 |
| 4.1.1 使用菌株 | 第86页 |
| 4.1.2 主要仪器设备 | 第86页 |
| 4.1.3 使用试剂 | 第86-87页 |
| 4.1.4 PCR反应体系与条件 | 第87页 |
| 4.1.5 核酸琼脂糖凝胶电泳 | 第87-88页 |
| 4.1.6 质粒的提取注意事项 | 第88页 |
| 4.1.7 质粒载体的酶切体系 | 第88页 |
| 4.1.8 粗酶的提取 | 第88-89页 |
| 4.1.9 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第89-90页 |
| 4.2 表达载体pColdIV-GM001835结果与讨论 | 第90-102页 |
| 4.2.1 目的基因的克隆 | 第90-93页 |
| 4.2.2 基因表达 | 第93-96页 |
| 4.2.3 高效液相色谱法酶活测定 | 第96-97页 |
| 4.2.4 不同条件下的酶活曲线 | 第97-99页 |
| 4.2.5 反馈调控 | 第99-102页 |
| 总结与展望 | 第102-104页 |
| 附录 | 第104-108页 |
| 参考文献 | 第108-116页 |
| 致谢 | 第116-118页 |
| 作者简历 | 第118-120页 |
| 学位论文数据集 | 第120页 |
