| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 文献综述 | 第15-34页 |
| 第一章 细胞凋亡机制及BCL-2基因家族的研究进展 | 第15-27页 |
| 1.1 细胞凋亡机制的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.1 外源性途径 | 第15-16页 |
| 1.1.2 内源性途径 | 第16-17页 |
| 1.1.3 内质网途径 | 第17页 |
| 1.2 BCL-2基因家族的研究进展 | 第17-27页 |
| 1.2.1 BCL-2家族成员的结构特点 | 第17-18页 |
| 1.2.2 BCL-2基因家族蛋白的功能 | 第18-27页 |
| 第二章 BCL-G基因的研究进展 | 第27-34页 |
| 2.1 BCL-G基因的基本特点 | 第27-28页 |
| 2.2 BCL-GS的结构和功能 | 第28-30页 |
| 2.2.1 BCL-GS的BH3结构域与亚细胞定位 | 第28页 |
| 2.2.2 BCL-GS基因是促凋亡蛋白p53的靶基因 | 第28页 |
| 2.2.3 BCL-GS基因与TEF、DBP等蛋白的相互作用 | 第28-29页 |
| 2.2.4 JAB1与BCL-GS相互作用加速了线粒体途径的细胞凋亡 | 第29-30页 |
| 2.3 BCL-GL的结构和功能 | 第30-33页 |
| 2.3.1 BCL-GL结构的特殊性与功能的关系 | 第30-31页 |
| 2.3.2 BCL-GL的翻译后修饰 | 第31页 |
| 2.3.3 BCL-GL与系统性红斑狼疮的发病密切相关 | 第31-33页 |
| 2.4 本研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 实验研究 | 第34-87页 |
| 第三章 猪BCL-G基因组织表达分布及其编码蛋白亚细胞定位的研究 | 第34-44页 |
| 3.1 材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 动物组织、细胞株和载体 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂耗材 | 第34-35页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第35页 |
| 3.2 方法 | 第35-37页 |
| 3.2.1 总RNA提取 | 第35页 |
| 3.2.2 RNA反转录 | 第35-36页 |
| 3.2.3 qRT-PCR检测pBCL-G基因的组织表达分布 | 第36页 |
| 3.2.4 无内毒素重组载体的提取 | 第36页 |
| 3.2.5 细胞转染 | 第36页 |
| 3.2.6 pBCL-G蛋白和关键结构域缺失蛋白表达的western blot检测 | 第36-37页 |
| 3.2.7 pBCL-G蛋白和关键结构域缺失蛋白的亚细胞定位 | 第37页 |
| 3.3 结果 | 第37-42页 |
| 3.3.1 pBCL-G基因广泛表达于多种组织 | 第37-40页 |
| 3.3.2 融合蛋白表达的荧光鉴定 | 第40页 |
| 3.3.3 融合蛋白表达的western blot鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.4 融合蛋白的亚细胞定位 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-43页 |
| 3.5 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 稳定表达猪BCL-G蛋白细胞株的建立 | 第44-48页 |
| 4.1 材料 | 第44-45页 |
| 4.1.1 细胞株和载体 | 第44页 |
| 4.1.2 主要试剂耗材 | 第44页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第44-45页 |
| 4.2 方法 | 第45页 |
| 4.2.1 无内毒素载体的提取 | 第45页 |
| 4.2.2 细胞转染 | 第45页 |
| 4.2.3 G418对SUVEC细胞最佳筛选浓度的确定 | 第45页 |
| 4.2.4 稳定表达GFP-pBCL-G或GFP蛋白细胞株的建立 | 第45页 |
| 4.2.5 Western blot检测鉴定稳定表达细胞株 | 第45页 |
| 4.3 结果 | 第45-47页 |
| 4.3.1 稳定表达GFP-pBCL-G或GFP蛋白细胞株的荧光鉴定 | 第45-46页 |
| 4.3.2 稳定表达GFP-pBCL-G或GFP蛋白细胞株的western blot鉴定 | 第46-47页 |
| 4.4 讨论 | 第47页 |
| 4.5 小结 | 第47-48页 |
| 第五章 猪BCL-G对聚肌胞和星孢菌素等因子诱导的细胞凋亡具有促进作用 | 第48-55页 |
| 5.1 材料 | 第48-49页 |
| 5.1.1 细胞与载体 | 第48页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第49页 |
| 5.2 方法 | 第49页 |
| 5.2.1 细胞转染 | 第49页 |
| 5.2.2 用polyI:C或STS对转染的细胞进行诱导 | 第49页 |
| 5.2.3 细胞形态学观察和Hoechst33342染色 | 第49页 |
| 5.2.4 流式细胞术检测细胞凋亡率 | 第49页 |
| 5.3 结果 | 第49-54页 |
| 5.3.1 polyI:C诱导对细胞形态学的影响 | 第49-50页 |
| 5.3.2 STS诱导对细胞形态学的影响 | 第50-51页 |
| 5.3.3 pBCL-G蛋白促进polyI:C诱导的细胞凋亡率检测 | 第51-54页 |
| 5.4 讨论 | 第54页 |
| 5.5 小结 | 第54-55页 |
| 第六章 猪BCL-G蛋白与JAB1或MELK蛋白的相互作用研究 | 第55-77页 |
| 6.1 材料 | 第55-56页 |
| 6.1.1 细胞与载体 | 第55页 |
| 6.1.2 主要试剂耗材 | 第55-56页 |
| 6.1.3 主要仪器 | 第56页 |
| 6.2 方法 | 第56-59页 |
| 6.2.1 pJAB1基因的克隆和分析 | 第56-57页 |
| 6.2.2 pBCL-G、pJAB1和pMELK基因真核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 6.2.3 myc-pBCL-G、HA-pJAB1和HA-pMELK融合蛋白在真核细胞中的表达 | 第58页 |
| 6.2.4 GFP-pJAB1融合蛋白在真核细胞中的表达及鉴定 | 第58页 |
| 6.2.5 pBCL-G与pJAB1或pMELK蛋白相互作用的免疫共沉淀实验 | 第58-59页 |
| 6.2.6 pJAB1或pMELK蛋白对pBCL-G蛋白亚细胞定位的影响 | 第59页 |
| 6.3 结果 | 第59-74页 |
| 6.3.1 pJAB1基因克隆和基本特性分析结果 | 第59-62页 |
| 6.3.2 与pJAB1蛋白相互作用蛋白的预测和GO分析 | 第62-63页 |
| 6.3.3 JAB1在物种进化过程中高度保守 | 第63-65页 |
| 6.3.4 pJAB1基因组织表达分布结果 | 第65-67页 |
| 6.3.5 pBCL-G、pJAB1和pMELK基因真核表达载体的鉴定 | 第67-68页 |
| 6.3.6 myc-pBCL-G、HA-pJAB1和HA-MELK等融合蛋白在真核细胞中表达的检测 | 第68页 |
| 6.3.7 GFP-pJAB1融合蛋白在真核细胞中表达的检测 | 第68-69页 |
| 6.3.8 pBCL-G能够与pJAB1蛋白相互作用 | 第69-70页 |
| 6.3.9 pBCL-G能够与pMELK蛋白相互作用 | 第70-71页 |
| 6.3.10 pJAB1能够影响pBCL-G蛋白的亚细胞定位 | 第71-72页 |
| 6.3.11 pMELK能够影响pBCL -G蛋白的亚细胞定位 | 第72-74页 |
| 6.4 讨论 | 第74-75页 |
| 6.5 小结 | 第75-77页 |
| 第七章 猪BCL-G与JAB1相互作用对STS诱导的细胞凋亡的促进作用及其机制研究 | 第77-87页 |
| 7.1 材料 | 第77-78页 |
| 7.1.1 细胞与载体 | 第77页 |
| 7.1.2 主要试剂耗材 | 第77页 |
| 7.1.3 主要仪器 | 第77-78页 |
| 7.2 方法 | 第78-79页 |
| 7.2.1 STS诱导的稳定过表达pBCL-G蛋白的SUVEC细胞凋亡检测 | 第78页 |
| 7.2.2 STS诱导的瞬时过表达pJAB1蛋白的SUVEC细胞凋亡检测 | 第78页 |
| 7.2.3 STS诱导的共表达pBCL-G和pJAB1蛋白的SUVEC细胞凋亡检测 | 第78页 |
| 7.2.4 过表达pBCL-G蛋白的细胞凋亡过程中caspase-3,8,9蛋白的活性检测 | 第78-79页 |
| 7.2.5 过表达pBCL-G蛋白的细胞凋亡过程中caspase-3,8,9蛋白的westernblot检测 | 第79页 |
| 7.2.6 过表达pJAB1蛋白的细胞凋亡过程中caspase-3,8,9蛋白的活性检测 | 第79页 |
| 7.2.7 过表达pJAB1蛋白的细胞凋亡过程中caspase-3,8,9蛋白的westernblot检测 | 第79页 |
| 7.3 结果 | 第79-84页 |
| 7.3.1 稳定过表达pBCL-G蛋白能够促进STS诱导的SUVEC细胞凋亡 | 第79-80页 |
| 7.3.2 瞬时过表达pJAB1蛋白能够促进STS诱导的SUVEC细胞凋亡 | 第80-81页 |
| 7.3.3 pBCL-G和pJAB1能够协同促进STS诱导的SUVEC细胞凋亡 | 第81-82页 |
| 7.3.4 过表达pBCL-G蛋白的细胞凋亡过程中caspase-3,8,9蛋白均发生活化 | 第82-83页 |
| 7.3.5 过表达pJAB1蛋白的细胞凋亡过程中caspase-3和caspase-9发生活化 | 第83-84页 |
| 7.4 讨论 | 第84-85页 |
| 7.5 小结 | 第85-87页 |
| 结论与创新点 | 第87-88页 |
| 结论 | 第87页 |
| 创新点 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-105页 |
| 主要缩略词和和中英文对照表 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 作者简介 | 第107-108页 |
