| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 单宁和单宁酶简介 | 第12-14页 |
| 1.1.1 单宁 | 第12页 |
| 1.1.2 单宁酶 | 第12-14页 |
| 1.2 单宁酶的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1 产单宁酶微生物 | 第14-15页 |
| 1.2.2 单宁酶的物理化学性质 | 第15页 |
| 1.2.3 单宁酶的酶学性质 | 第15-17页 |
| 1.3 单宁酶的分析方法 | 第17-18页 |
| 1.4 单宁酶的发酵生产 | 第18-19页 |
| 1.4.1 液体发酵工艺 | 第18-19页 |
| 1.4.2 固体发酵工艺 | 第19页 |
| 1.5 单宁酶分离纯化 | 第19-20页 |
| 1.6 单宁酶固定化 | 第20页 |
| 1.7 单宁酶的应用 | 第20-21页 |
| 1.8 本课题立题意义和研究内容 | 第21-23页 |
| 1.8.1 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 1.8.2 本文主要研究内容及技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 无花果曲霉产单宁酶发酵工艺优化 | 第23-38页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第23页 |
| 2.1.1 主要试剂与仪器 | 第23页 |
| 2.1.2 菌种 | 第23页 |
| 2.1.3 培养基 | 第23页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-25页 |
| 2.2.1 发酵方式的选择 | 第23-24页 |
| 2.2.2 单宁酶酶活力测定 | 第24页 |
| 2.2.3 固体发酵产酶培养基优化 | 第24页 |
| 2.2.4 固态发酵工艺参数的优化 | 第24-25页 |
| 2.2.5 验证试验 | 第25页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第25-37页 |
| 2.3.1 没食子酸标准曲线绘制 | 第25-26页 |
| 2.3.2 不同发酵方式产酶结果 | 第26-27页 |
| 2.3.3 菌株Gim3.6发酵产酶培养基优化 | 第27-31页 |
| 2.3.4 菌株Gim3.6发酵工艺参数研究 | 第31-37页 |
| 2.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 反胶束体系萃取纯化单宁酶研究 | 第38-49页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第38页 |
| 3.1.1 主要试剂与仪器 | 第38页 |
| 3.1.2 材料 | 第38页 |
| 3.2 试验方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 蛋白质含量测定 | 第38页 |
| 3.2.2 单宁酶酶活力检测方法 | 第38-39页 |
| 3.2.3 有机溶剂沉淀 | 第39页 |
| 3.2.4 反胶团体系萃取单宁酶研究 | 第39页 |
| 3.2.5 透析 | 第39页 |
| 3.2.6 单宁酶的Sephacryl S-200层析 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-48页 |
| 3.3.1 反胶团体系的选择 | 第40-41页 |
| 3.3.2 前萃取因素对萃取率的影响 | 第41-43页 |
| 3.3.3 后萃取因素对萃取率的影响 | 第43-46页 |
| 3.3.4 单宁酶的分子筛层析 | 第46-47页 |
| 3.3.5 单宁酶分子量测定 | 第47-48页 |
| 3.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第四章 单宁酶酶学性质研究 | 第49-58页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第49页 |
| 4.1.1 主要试剂与仪器 | 第49页 |
| 4.1.2 菌种 | 第49页 |
| 4.2 试验方法 | 第49-50页 |
| 4.2.1 单宁酶粗酶液的制备 | 第49页 |
| 4.2.2 酶活力检测方法 | 第49页 |
| 4.2.3 单宁酶酶学性质的研究 | 第49页 |
| 4.2.4 酶在冷藏条件下存储稳定性研究 | 第49页 |
| 4.2.5 温度对单宁酶活力影响及热稳定性研究 | 第49页 |
| 4.2.6 pH对单宁酶活力影响 | 第49-50页 |
| 4.2.7 单宁酶的米氏常数Km和Vmax | 第50页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第50-56页 |
| 4.3.1 酶在4℃条件冷藏存储稳定性 | 第50-51页 |
| 4.3.2 酶促反应的最适温度 | 第51页 |
| 4.3.3 单宁酶的热稳定性 | 第51-52页 |
| 4.3.4 酶促反应最适pH | 第52页 |
| 4.3.5 pH的稳定性 | 第52-53页 |
| 4.3.6 金属离子对酶活力的影响 | 第53页 |
| 4.3.7 底物浓度对酶促反应影响 | 第53-54页 |
| 4.3.8 Km和Vmax的确定 | 第54页 |
| 4.3.9 高效液相色谱法分析催化反应产物 | 第54-55页 |
| 4.3.10 发酵产物薄层层析分析 | 第55-56页 |
| 4.4 本章小结 | 第56-58页 |
| 第五章 单宁酶的固定化研究 | 第58-65页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第58页 |
| 5.1.1 主要试剂与仪器 | 第58页 |
| 5.2 试验方法 | 第58-59页 |
| 5.2.1 单宁酶酶液的制备 | 第58页 |
| 5.2.2 固定化单宁酶酶活力的测定 | 第58页 |
| 5.2.3 固定化载体的选择 | 第58-59页 |
| 5.2.4 海藻酸钠-壳聚糖微胶囊固定化单宁酶条件优化 | 第59页 |
| 5.2.5 正交法优化固定化条件 | 第59页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第59-64页 |
| 5.3.1 固定化单宁酶载体的选择 | 第59-60页 |
| 5.3.2 海藻酸钠-壳聚糖固定化单宁酶条件的确定 | 第60-64页 |
| 5.3.3 固定化酶操作稳定性 | 第64页 |
| 5.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第六章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 6.1 结论 | 第65-66页 |
| 6.2 本文创新点 | 第66页 |
| 6.3 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录Ⅰ 主要试剂 | 第74-75页 |
| 附录Ⅱ 主要仪器设备 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第77页 |
