| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌简介 | 第10-11页 |
| 1.1.1 苏云金芽胞杆菌的生物学特性 | 第10页 |
| 1.1.2 苏云金芽胞杆菌的杀虫晶体蛋白 | 第10-11页 |
| 1.2 双组分信号转导系统简介 | 第11-17页 |
| 1.2.1 双组分信号转导系统 | 第11-12页 |
| 1.2.2 组氨酸激酶 | 第12-14页 |
| 1.2.3 应答调节蛋白 | 第14-15页 |
| 1.2.4 革兰氏阳性细菌的双组分信号转导系统的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 基因组序列来源 | 第19页 |
| 2.1.2 菌种与质粒 | 第19-21页 |
| 2.1.3 培养基、抗生素 | 第21-22页 |
| 2.1.4 仪器和试剂 | 第22页 |
| 2.1.4.1 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.4.2 主要试剂 | 第22页 |
| 2.1.5 常用溶液与缓冲液 | 第22-23页 |
| 2.1.5.1 大肠杆菌质粒提取液 | 第22页 |
| 2.1.5.2 总DNA提取液 | 第22页 |
| 2.1.5.3 核酸电泳缓冲液 | 第22页 |
| 2.1.5.4 RNA试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.5.5 SDS-PAGE电泳用 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 HKs和RRs预测及结构与功能分析 | 第23页 |
| 2.2.2 DNA体外操作方法 | 第23-25页 |
| 2.2.2.1 DNA体外重组操作 | 第23页 |
| 2.2.2.2 苏云金芽胞杆菌染色体DNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2.3 大肠杆菌质粒的提取 | 第24页 |
| 2.2.2.4 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第25页 |
| 2.2.4 RNA操作方法 | 第25-26页 |
| 2.2.4.1 Trizol提取RNA | 第25-26页 |
| 2.2.4.2 测RNA质量抽提的质量 | 第26页 |
| 2.2.4.3 RT-PCR步骤 | 第26页 |
| 2.2.5 蛋白质SDA-PAGE | 第26-27页 |
| 2.2.5.1 SDS-PAGE样品及凝胶的制备 | 第26-27页 |
| 2.2.5.2 电泳、染色及脱色 | 第27页 |
| 2.2.6 目的基因的克隆、表达和纯化 | 第27页 |
| 2.2.6.1 yycG、yycH、yycI、yycF基因的克隆 | 第27页 |
| 2.2.6.2 YycG、YycH、YycI基因的表达 | 第27页 |
| 2.2.6.3 YycG、YycH、YycI蛋白纯化 | 第27页 |
| 2.2.7 细菌双杂交实验 | 第27-28页 |
| 2.2.7.1 细菌双杂交中质粒和载体的构建 | 第27页 |
| 2.2.7.2 细菌双杂交检测蛋白-蛋白相互作用 | 第27-28页 |
| 2.2.8 Pull-down实验 | 第28页 |
| 2.2.9 yycF过表达实验 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-49页 |
| 3.1 苏云金芽胞杆菌双组分系统的生物信息学分析 | 第29-35页 |
| 3.1.1 苏云金芽胞杆菌双组分系统的多样性 | 第29页 |
| 3.1.2 苏云金芽胞杆菌HKs的结构域组成及其分类 | 第29-30页 |
| 3.1.3 苏云金芽胞杆菌RRs的结构域组成及其分类 | 第30-31页 |
| 3.1.4 苏云金芽胞杆菌TCS的功能预测 | 第31-33页 |
| 3.1.5 苏云金芽胞杆菌TCS的调控网络 | 第33-34页 |
| 3.1.6 小结 | 第34-35页 |
| 3.2 yycG、yycF、yycH和yycI的基因克隆、原核表达和纯化 | 第35-39页 |
| 3.2.1 yycG、yycH和yycI原核表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 3.2.2 YycG、YycH和YycI的表达和纯化 | 第37-38页 |
| 3.2.3 小结 | 第38-39页 |
| 3.3 YycG、YycH和YycI之间的物理作用 | 第39-40页 |
| 3.3.1 YycH、YycI与YycG的物理作用 | 第39页 |
| 3.3.2 小结 | 第39-40页 |
| 3.4 细菌双杂交实验分析YycG与YycH、YycI的相互作用 | 第40-44页 |
| 3.4.1 细菌双杂交重组质粒的构建 | 第40-43页 |
| 3.4.2 YycG与YycH、YycI的相互作用 | 第43-44页 |
| 3.4.3 小结 | 第44页 |
| 3.5 应答蛋白YycF在BMB171中的过表达研究 | 第44-49页 |
| 3.5.1 yycF过表达载体构建 | 第44-45页 |
| 3.5.2 原始BMB171菌株和过表达重组菌株的RT-PCR分析 | 第45-46页 |
| 3.5.3 原始菌株和过表达重组菌株的生物学特性比较 | 第46-47页 |
| 3.5.4 原始BMB171菌株和过表达重组菌株的比较 | 第47-48页 |
| 3.5.5 小结 | 第48-49页 |
| 4 总结与讨论 | 第49-52页 |
| 4.1 总结 | 第49-50页 |
| 4.2 讨论 | 第50-51页 |
| 4.3 下一步工作设想 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附录 | 第61-72页 |
