| 论文创新点 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1. 引言 | 第15-36页 |
| 1.1 肝癌 | 第15-17页 |
| 1.1.1 肝癌的病因与诊断 | 第15-16页 |
| 1.1.2 肝癌的预防和治疗 | 第16-17页 |
| 1.2 HBV与肝癌 | 第17-19页 |
| 1.2.1 HBV基因组结构和编码蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.2 HBV感染和HCC肿瘤发生 | 第18-19页 |
| 1.3 HCC相关的信号转导途径及关键致癌分子 | 第19-25页 |
| 1.3.1 Wnt/β-catenin信号通路 | 第20-22页 |
| 1.3.2 Epidermal growth factor(EGF)信号途径 | 第22-23页 |
| 1.3.3 TGF-β与HCC | 第23-24页 |
| 1.3.4 抑癌基因P53 | 第24-25页 |
| 1.4 EMT与HCC | 第25-30页 |
| 1.4.1 EMT与HCC肿瘤迁移和侵袭 | 第25-28页 |
| 1.4.2 肿瘤发生中EMT的其它作用 | 第28-30页 |
| 1.5 Clorf61基因研究进展 | 第30-33页 |
| 1.5.1 Clorf61基因的发现 | 第30-31页 |
| 1.5.2 Clorf61的结构 | 第31页 |
| 1.5.3 Clorf61基因的功能 | 第31-33页 |
| 1.6 本研究出发点 | 第33-36页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第36-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-40页 |
| 2.1.1 细胞株和菌株 | 第36页 |
| 2.1.2 药品试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.3 抗体 | 第37页 |
| 2.1.4 质粒及转染试剂 | 第37页 |
| 2.1.5 主要实验仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.1.6 主要试剂的配制 | 第38-40页 |
| 2.1.7 生物学软件 | 第40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-57页 |
| 2.2.1 RNA的提取和定量 | 第40-41页 |
| 2.2.1.1 细胞系总RNA的提取 | 第40-41页 |
| 2.2.1.2 总RNA浓度测定与检测 | 第41页 |
| 2.2.2 RT-PCR | 第41页 |
| 2.2.3 PCR扩增反应 | 第41-42页 |
| 2.2.4 电泳 | 第42页 |
| 2.2.5 Quantitative PCR检测Clorf61 mRNA表达水平 | 第42-43页 |
| 2.2.6 大肠杆菌感受态DH5α的制备 | 第43页 |
| 2.2.7 感受态细胞转化 | 第43-44页 |
| 2.2.8 重组质粒的构建及酶切鉴定 | 第44-47页 |
| 2.2.9 多克隆抗体制备和分析 | 第47页 |
| 2.2.10 组织芯片 | 第47-49页 |
| 2.2.11 免疫组化打分 | 第49页 |
| 2.2.12 细胞转染 | 第49页 |
| 2.2.13 激光共聚焦显微分析(Confocal) | 第49-50页 |
| 2.2.14 细胞复苏、传代及冻存 | 第50-51页 |
| 2.2.15 慢病毒包装及细胞感染 | 第51页 |
| 2.2.16 流式细胞仪分选细胞 | 第51-52页 |
| 2.2.17 细胞总蛋白的提取及定量 | 第52页 |
| 2.2.18 Western Blot | 第52-53页 |
| 2.2.19 细胞增殖实验 | 第53页 |
| 2.2.20 细胞周期分析 | 第53-54页 |
| 2.2.21 平板克隆形成实验 | 第54页 |
| 2.2.22 细胞划痕愈合实验 | 第54-55页 |
| 2.2.23 细胞迁移实验 | 第55页 |
| 2.2.24 细胞侵袭实验 | 第55-56页 |
| 2.2.25 统计学分析 | 第56-57页 |
| 3. 实验结果 | 第57-91页 |
| 3.1 Clorf61在人类胚胎发育过程中的表达 | 第57-58页 |
| 3.2 Clorf61基因的染色体定位与克隆 | 第58-61页 |
| 3.3 Clorf61多克隆抗体的制备和分析 | 第61-63页 |
| 3.3.1 Clorf61多克隆抗体的制备 | 第61页 |
| 3.3.2 Clorf61多克隆抗体的效价和特异性检测 | 第61-63页 |
| 3.4 Clorf61的流行病学调查 | 第63-74页 |
| 3.4.1 Clorf61在骨骼疾病患者中的表达调查 | 第64-68页 |
| 3.4.2 Clorf61在肝脏疾病患者中的表达调查 | 第68-74页 |
| 3.4.2.1 Clorf61的表达变化与肝脏疾病进展相关 | 第68-71页 |
| 3.4.2.2 HCC中Clorf61的表达与HBV感染相关 | 第71-74页 |
| 3.5 Clorf61基因在肝癌细胞株中的表达检测 | 第74-79页 |
| 3.5.1 Western Blotting和Q-PCR检测Clorf61的表达 | 第74-76页 |
| 3.5.2 Clorf61的亚细胞定位 | 第76-79页 |
| 3.6 Clorf61稳转细胞系的建立 | 第79-81页 |
| 3.6.1 慢病毒载体的构建 | 第79页 |
| 3.6.2 稳转细胞系的分选和鉴定 | 第79-81页 |
| 3.7 Clorf61对细胞增值和克隆形成的影响 | 第81-84页 |
| 3.7.1 Clorf61促进细胞增殖 | 第81页 |
| 3.7.2 Clorf61促进细胞克隆形成 | 第81-83页 |
| 3.7.3 Clorf61对细胞周期及周期相关蛋白的影响 | 第83-84页 |
| 3.8 Clorf61促进细胞迁移和侵袭 | 第84-87页 |
| 3.9 Clorf61诱导细胞发生EMT | 第87-91页 |
| 3.9.1 Clorf61对EMT标记蛋白表达的影响 | 第87-89页 |
| 3.9.2 Clorf61促使细胞形态变化 | 第89-91页 |
| 4. 讨论 | 第91-104页 |
| 4.1 研究背景 | 第91-92页 |
| 4.2 Clorf61基因的克隆和抗体制备 | 第92-93页 |
| 4.3 Clorf61的流行病学调查 | 第93-95页 |
| 4.4 HBV促进Clorf61的表达 | 第95-96页 |
| 4.5 Clorf61的细胞系表达谱和亚细胞定位 | 第96-98页 |
| 4.6 Clorf61促进细胞增殖和克隆形成 | 第98-99页 |
| 4.7 Clorf61促进细胞迁移和侵袭 | 第99-100页 |
| 4.8 Clorf61促进细胞发生EMT转换 | 第100-104页 |
| 研究总结与展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-120页 |
| 缩略词 | 第120-121页 |
| 博士研究生期间发表的论文 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122-123页 |
