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鹅ChREBP基因克隆及其在肝脂肪变性中的作用初步研究

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
前言第13页
1 文献综述第13-23页
   ·ChREBP的发现第13-14页
   ·ChREBP蛋白的结构特征与活性调节第14-17页
     ·ChREBP的功能区第14-15页
     ·ChREBP蛋白的活性调节第15-17页
   ·ChREBP的组织表达特性第17页
   ·ChREBP的功能研究第17-19页
     ·在糖酵解和脂肪合成中的作用第17-19页
     ·其他作用第19页
   ·影响ChREBP表达的因素第19-21页
     ·营养和激素第19-21页
     ·药物第21页
   ·ChREBP基因的表达调控第21-22页
   ·本实验的目的及意义第22-23页
2 材料与方法第23-36页
   ·实验动物饲养与样品的采集第23-24页
     ·实验材料第23页
     ·填饲的饲养管理第23页
     ·血样的采集与处理第23-24页
     ·组织样品采集第24页
   ·实验主要仪器与试剂第24-27页
     ·主要实验仪器第24-25页
     ·主要试剂盒与试剂第25页
     ·主要试剂配制第25-27页
   ·测定指标及测定方法第27-30页
     ·肝组织生化指标的测定第27页
     ·血浆参数的测定第27页
     ·基因mRNA表达检测第27-30页
   ·鹅ChREBP基因5’-RACE和3’-RACE第30-34页
     ·5’-RACE-Ready cDNA和3’-RACE-Ready cDNA的合成第30-31页
     ·3’-RACE第31-32页
     ·5’-RACE第32页
     ·RACE产物的克隆及重组质粒的筛选和鉴定第32-34页
   ·序列的生物信息学分析第34页
   ·细胞水平检测第34-35页
     ·细胞培养第34-35页
     ·MTT比色法测细胞活性第35页
     ·TG含量的检测第35页
     ·基因表达检测第35页
       ·肝细胞总RNA的提取第35页
       ·被检测基因的引物设计与合成第35页
       ·实时定量引物特异性性的检测与鉴定第35页
       ·反转录和实时荧光定量PCR第35页
   ·数据的统计分析第35-36页
3. 结果与分析第36-51页
   ·构建SSH文库筛选差异表达的基因ChREBP第36页
   ·实时定量鉴定ChREBP差异表达第36-37页
   ·RACE技术获得ChREBP基因全长第37-38页
     ·3’-RACE结果与分析第37页
     ·5’-RACE结果与分析第37-38页
     ·全长ChREBP的拼接与鉴定第38页
   ·ChREBP基因的生物信息学分析第38-45页
     ·核苷酸水平上的分析第38-39页
     ·氨基酸水平上的分析第39-45页
   ·ChREBP基因组织表达及填饲对其在鹅肝脏中表达的影响第45-47页
     ·组织表达分布第45-46页
     ·填饲14天对ChREBP基因在鹅肝脏中表达的影响第46页
     ·ChREBP基因在肝脏中的表达与血浆参数、肝内TG的相关分析第46-47页
   ·葡萄糖、胰岛素和LXR激动剂对ChREBP基因表达的影响第47-51页
     ·葡萄糖、胰岛素和LXR激动剂对鹅原代肝细胞的影响第47-48页
     ·葡萄糖、胰岛素和LXRα激动剂对鹅原代肝细胞TG沉积的影响第48-50页
     ·葡萄糖、胰岛素和LXR激动剂对ChREBP表达的影响第50-51页
4 讨论第51-58页
   ·ChREBP的cDNA全长克隆及生物信息学分析第51-52页
   ·ChREBP基因在鹅各组织中的表达差异第52页
   ·填饲对鹅肝组织中ChREBP基因表达的影响第52-54页
   ·胰岛素对鹅原代肝细胞中ChREBP表达的影响第54-55页
   ·葡萄糖对鹅原代肝细胞中ChREBP表达的影响第55-56页
   ·LXR激动剂T0901317对ChREBP表达的影响第56页
   ·脂肪酸对ChREBP基因表达的影响第56-58页
5 结论第58-59页
参考文献第59-68页
致谢第68-69页
附录:硕士研究生学习期间参与的科研项目和发表文章第69页

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