| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 引言 | 第18-26页 |
| 1.1 研究背景 | 第18-20页 |
| 1.2 研究动机与目的 | 第20-21页 |
| 1.3 国内外研究现状 | 第21-24页 |
| 1.4 研究的内容与方法 | 第24-26页 |
| 第一部分 Epk对巨噬细胞的影响 | 第26-44页 |
| 2.1.1 材料与方法 | 第27-35页 |
| 2.1.1.1 实验材料与设备 | 第27-29页 |
| 2.1.1.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.1.1.2.1 抗动脉粥样硬化apoE功能拟肽的设计 | 第29页 |
| 2.1.1.2.2 重组质粒pTWIN1-EpK表达质粒载体的构建 | 第29页 |
| 2.1.1.2.3 拟肽EpK的表达与纯化 | 第29-30页 |
| 2.1.1.2.4 拟肽EpK二级结构的检测 | 第30页 |
| 2.1.1.2.5 拟肽EpK的脂质结合活性测定 | 第30-31页 |
| 2.1.1.2.6 拟肽EpK与血浆脂蛋白的结合能力测定 | 第31页 |
| 2.1.1.2.7 拟肽EpK对巨噬细胞胆固醇外流及炎症因子的影响 | 第31-33页 |
| 2.1.1.2.8 含EpK的HDL对巨噬细胞外流及炎症的影响 | 第33页 |
| 2.1.1.2.9 统计学分析 | 第33-35页 |
| 2.1.2 实验结果 | 第35-42页 |
| 2.1.2.1 拟肽EpK的表达、纯化与鉴定 | 第35页 |
| 2.1.2.2 纯化的EpK肽二级结构及结合脂质活性 | 第35-38页 |
| 2.1.2.3 EpK增强巨噬细胞胆固醇外流和抑制巨噬细胞炎症反应 | 第38-39页 |
| 2.1.2.4 含EpK的HDL增强巨噬细胞胆固醇外流和抑制巨噬细胞炎症 | 第39-42页 |
| 2.1.3 讨论 | 第42-44页 |
| 第二部分 Epk对apoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响 | 第44-67页 |
| 2.2.1 材料与方法 | 第45-54页 |
| 2.2.1.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 2.2.1.2 实验方法 | 第46-54页 |
| 2.2.1.2.1 重组质粒pWPI-EpK-GFP的构建 | 第46-47页 |
| 2.2.1.2.2 慢病毒包装 | 第47-48页 |
| 2.2.1.2.3 慢病毒的浓缩和滴度检测 | 第48页 |
| 2.2.1.2.4 肝脏EpK高表达apoE~(-/-)小鼠模型的建立 | 第48-49页 |
| 2.2.1.2.5 小鼠血浆生化指标分析 | 第49-50页 |
| 2.2.1.2.6 实验小鼠解剖 | 第50页 |
| 2.2.1.2.7 ApoE~(-/-)小鼠肝脏及血浆EpK鉴定 | 第50页 |
| 2.2.1.2.8 实验小鼠动脉粥样硬化斑块的量化评估 | 第50-51页 |
| 2.2.1.2.9 qPCR检测小鼠肝脏炎症相关基因mRNA水平 | 第51-52页 |
| 2.2.1.2.10 蛋白免疫印迹检测小鼠血浆相关蛋白水平 | 第52-53页 |
| 2.2.1.2.11 统计学分析 | 第53-54页 |
| 2.2.2 实验结果 | 第54-63页 |
| 2.2.2.1 重组慢病毒表达质粒载体pWPI -EpK-GFP的构建与鉴定 | 第54-55页 |
| 2.2.2.2 pWPI-EpK-GFP慢病毒质粒载体表达检测 | 第55-56页 |
| 2.2.2.3 Lv-GFP/v-EpK-GFP慢病毒颗粒浓缩和滴度检测 | 第56页 |
| 2.2.2.4 ApoE~(-/-)小鼠肝脏EpK高表达模型的建立 | 第56-58页 |
| 2.2.2.5 肝脏EpK高表达对apoE~(-/-)小鼠脂质水平的影响 | 第58-60页 |
| 2.2.2.6 肝脏EpK高表达降低apoE~(-/-)小鼠血浆急性应激蛋白因子SAA水平 | 第60-61页 |
| 2.2.2.7 肝脏EpK高表达对apoE~(-/-)小鼠肝脏炎症相关基因表达的影响 | 第61页 |
| 2.2.2.8 肝脏EpK高表达减小apoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块 | 第61-63页 |
| 2.2.3 讨论 | 第63-66页 |
| 小结 | 第66-67页 |
| 第三部分 hEp对apoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的影响 | 第67-89页 |
| 2.3.1 材料与方法 | 第68-75页 |
| 2.3.1.1 实验材料 | 第68页 |
| 2.3.1.2 实验方法 | 第68-75页 |
| 2.3.1.2.1 hEp蛋白二级结构检测 | 第68-69页 |
| 2.3.1.2.2 巨噬细胞培养 | 第69页 |
| 2.3.1.2.3 巨噬细胞脂质抽提及测定 | 第69页 |
| 2.3.1.2.4 巨噬细胞炎症因子测定 | 第69-70页 |
| 2.3.1.2.5 重组慢病毒质粒表达载体pWPI-hEp-GFP的构建 | 第70页 |
| 2.3.1.2.6 HepG2细胞转染及LDLR基因表达水平测定 | 第70-71页 |
| 2.3.1.2.7 肝脏hEp高表达apoE~(-/-)小鼠实验模型的建立 | 第71-72页 |
| 2.3.1.2.8 实验小鼠血浆生化指标分析 | 第72-73页 |
| 2.3.1.2.9 实验小鼠解剖取材 | 第73页 |
| 2.3.1.2.10 肝脏组织hEp表达鉴定 | 第73页 |
| 2.3.1.2.11 实验小鼠动脉粥样硬化斑块的量化评估 | 第73-74页 |
| 2.3.1.2.12 qPCR和蛋白免疫印迹检测肝脏及血浆相关基因mRNA和蛋白水平 | 第74页 |
| 2.3.1.2.13 统计学分析 | 第74-75页 |
| 2.3.2 实验结果 | 第75-86页 |
| 2.3.2.1 拟肽hEp的二级结构分析 | 第75页 |
| 2.3.2.2 拟肽hEp降低巨噬细胞脂质沉积 | 第75-76页 |
| 2.3.2.3 拟肽hEp抑制LPS刺激下巨噬细胞炎症反应 | 第76-77页 |
| 2.3.2.4 pWPI-hEp-GFP慢病毒质粒载体鉴定 | 第77-78页 |
| 2.3.2.5 ApoE~(-/-)小鼠肝脏hEp高表达模型的建立 | 第78-80页 |
| 2.3.2.6 hEp高表达上调apoE~(-/-)小鼠肝脏LDLR基因表达、降低血脂水平 | 第80-82页 |
| 2.3.2.7 肝脏hEp高表达改善apoE~(-/-)小鼠氧还状态 | 第82-84页 |
| 2.3.2.8 肝脏hEp高表达减小apoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块 | 第84-86页 |
| 2.3.3 讨论 | 第86-88页 |
| 小结 | 第88-89页 |
| 全文总结 | 第89-90页 |
| 展望 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-97页 |
| 攻读博士学位期间的主要科研成果 | 第97-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
