| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-30页 |
| ·转基因作物研究进展 | 第16-20页 |
| ·Bt 转基因抗虫作物的研究进展 | 第16-18页 |
| ·转基因耐除草剂作物的研究进展 | 第18-19页 |
| ·复合性状转基因作物的研究进展 | 第19-20页 |
| ·获得复合性状转基因作物的方法 | 第20-21页 |
| ·连接肽简介 | 第21-27页 |
| ·2A 简介 | 第21-24页 |
| ·LP4 简介 | 第24-25页 |
| ·IRES 简介 | 第25-26页 |
| ·NIa 简介 | 第26页 |
| ·2A 和 LP4 在植物基因工程方面的应用 | 第26-27页 |
| ·瞬时表达与稳定表达研究方法 | 第27-29页 |
| ·瞬时表达系统 | 第27页 |
| ·原生质体瞬时表达系统 | 第27-28页 |
| ·稳定表达系统与筛选体系 | 第28页 |
| ·PMI/甘露糖筛选体系 | 第28-29页 |
| ·本研究的目的意义 | 第29-30页 |
| 第二章 在玉米瞬时表达体系中研究连接肽 LP4、2A 和 LP4/2A 的剪切 | 第30-50页 |
| ·实验材料 | 第30-34页 |
| ·植物材料 | 第30页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·各种酶及试剂 | 第30页 |
| ·常用溶液配制 | 第30-31页 |
| ·玉米原生质体制备所需溶液 | 第31页 |
| ·质粒 DNA 提取所需溶液 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备所需溶液 | 第32页 |
| ·GUS 分析所需溶液： | 第32页 |
| ·Western 印迹所需溶液 | 第32-33页 |
| ·实验所用引物 | 第33页 |
| ·主要仪器设备 | 第33-34页 |
| ·研究方法 | 第34-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·重组质粒的转化 | 第34页 |
| ·碱裂解法少量提取质粒 DNA | 第34-35页 |
| ·用 QIAGEN-tip100 试剂盒大量提取质粒 | 第35页 |
| ·玉米的种植 | 第35页 |
| ·原生质体分离 | 第35-36页 |
| ·原生质体计数 | 第36页 |
| ·原生质体活力测定 | 第36页 |
| ·PEG 转化 | 第36页 |
| ·GUS 组织化学分析 | 第36-37页 |
| ·GUS 荧光分析 | 第37页 |
| ·GFP 荧光分析 | 第37页 |
| ·Western 印迹 | 第37-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-49页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第39-45页 |
| ·玉米原生质体的分离条件优化 | 第45-46页 |
| ·GUS 检测 | 第46页 |
| ·GFP 检测 | 第46-48页 |
| ·Western blot 检测 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第三章 利用连接肽 LP4/2A 获得抗虫耐除草剂转基因玉米 | 第50-70页 |
| ·实验材料 | 第50-52页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·菌株与质粒 | 第50页 |
| ·各种酶与试剂 | 第50页 |
| ·培养基配制 | 第50-51页 |
| ·幼胚的剥离所需溶液 | 第51页 |
| ·玉米基因组 DNA 提取缓冲液 | 第51页 |
| ·Southern blot 所需溶液 | 第51页 |
| ·ELISA 分析所需溶液 | 第51页 |
| ·实验所需引物 | 第51-52页 |
| ·研究方法 | 第52-58页 |
| ·PMI 基因的克隆 | 第52页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第52页 |
| ·农杆菌转化 | 第52-53页 |
| ·玉米的授粉 | 第53页 |
| ·幼胚的剥离 | 第53页 |
| ·去培根与继代培养 | 第53页 |
| ·侵染液的准备，农杆菌侵染及玉米愈伤组织培养和植株再生 | 第53-54页 |
| ·植物组织基因组 DNA 的提取 | 第54页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第54-55页 |
| ·植物总 RNA 的提取 | 第55页 |
| ·RT-PCR 分析 | 第55-56页 |
| ·Southern blot | 第56-57页 |
| ·ELISA | 第57-58页 |
| ·转基因玉米的田间生物活性检测 | 第58页 |
| ·其余研究方法 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-69页 |
| ·磷酸甘露糖异构酶基因 manA 的克隆及序列分析 | 第58-59页 |
| ·植物表达载体 p2300UHLAGN 的构建 | 第59-61页 |
| ·筛选剂甘露糖浓度的摸索 | 第61页 |
| ·玉米愈伤组织的转化及 T0 代再生植株的获得 | 第61页 |
| ·T0 代再生植株的 PCR 检测 | 第61-62页 |
| ·T0 代再生植株的 Southern blot 检测 | 第62页 |
| ·T0 代再生植株的 RT-PCR 检测 | 第62-64页 |
| ·T0 代 PCR 阳性植株 Western blot 检测 | 第64页 |
| ·T0 代 PCR 阳性植株 ELISA 检测 | 第64-66页 |
| ·T1 代再生植株的 PCR 检测 | 第66页 |
| ·T1 代再生植株的 RT-PCR 检测 | 第66-67页 |
| ·T1 代再生植株的草甘膦耐受性检测 | 第67-68页 |
| ·T1 代转基因植株的玉米螟虫测 | 第68页 |
| ·T1 代再生植株的抗性级别确定及 ELISA 检测 | 第68-69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 第四章 改造 2A 以获得可商业化的连接肽 | 第70-76页 |
| ·实验材料 | 第70页 |
| ·植物材料 | 第70页 |
| ·实验所用引物 | 第70页 |
| ·研究方法 | 第70页 |
| ·结果与分析 | 第70-75页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第70-74页 |
| ·GFP 检测 | 第74页 |
| ·Western blot 检测 | 第74-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第五章 讨论 | 第76-79页 |
| ·原生质体瞬时表达系统 | 第76页 |
| ·多基因融合转化方法 | 第76-77页 |
| ·连接肽剪切分析 | 第77页 |
| ·利用连接肽增强基因表达 | 第77-78页 |
| ·转基因玉米抗虫性及草甘膦耐受性分析 | 第78页 |
| ·PMI/甘露糖筛选体系 | 第78-79页 |
| 第六章 结论 | 第79-80页 |
| ·结论 | 第79页 |
| ·创新点 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 附录 | 第91-92页 |
| 作者简历 | 第92页 |
