| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-43页 |
| ·细菌脂肪酶 | 第15-19页 |
| ·细菌脂肪酶的分类 | 第15-17页 |
| ·脂肪酶的结构 | 第17-19页 |
| ·细菌脂肪酶的分泌 | 第19-26页 |
| ·跨内膜转运系统 | 第20-22页 |
| ·革兰氏阴性菌的跨外膜分泌系统 | 第22-26页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶与脂肪酶的折叠 | 第26-37页 |
| ·蛋白折叠与分子伴侣 | 第26-27页 |
| ·立体分子伴侣 | 第27-30页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶 | 第30-34页 |
| ·依赖于脂肪酶特异折叠酶的脂肪酶的表达、折叠与分泌 | 第34-37页 |
| ·蛋白互作的研究方法 | 第37-42页 |
| ·酵母双杂交 | 第37-41页 |
| ·GST pull-down | 第41-42页 |
| ·本论文研究的目的与意义 | 第42-43页 |
| 第二章 不动杆菌脂肪酶与其特异折叠酶的功能分析 | 第43-62页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·仪器与试剂 | 第43页 |
| ·菌株与质粒 | 第43页 |
| ·溶液与培养基 | 第43-45页 |
| ·引物 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-52页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第45页 |
| ·脂肪酶与其折叠酶基因的克隆与序列分析 | 第45-46页 |
| ·脂肪酶基因大肠杆菌重组表达质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·脂肪酶及其折叠酶在大肠杆菌中的诱导表达 | 第47页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶的亲和层析纯化 | 第47-48页 |
| ·脂肪酶的体外变性与复性 | 第48页 |
| ·分光光度法测定脂肪酶酶活 | 第48-50页 |
| ·脂肪酶的底物特异性分析 | 第50页 |
| ·脂肪酶的酶学性质分析 | 第50-51页 |
| ·脂肪酶与折叠酶的体内共表达 | 第51-52页 |
| ·Western blot | 第52页 |
| ·实验结果 | 第52-60页 |
| ·脂肪酶与其折叠酶基因的克隆与序列分析 | 第52-53页 |
| ·脂肪酶及折叠酶在大肠杆菌中的诱导表达与纯化 | 第53-54页 |
| ·脂肪酶的体外变性与复性 | 第54-55页 |
| ·脂肪酶的酶学性质分析 | 第55-59页 |
| ·脂肪酶与其特异折叠酶的体内共表达 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·小结 | 第61-62页 |
| 第三章 不动杆菌脂肪酶与其特异折叠酶的相互作用 | 第62-87页 |
| ·实验材料 | 第62-66页 |
| ·仪器与试剂 | 第62页 |
| ·菌株与质粒 | 第62页 |
| ·溶液与培养基 | 第62-64页 |
| ·引物 | 第64-66页 |
| ·实验方法 | 第66-73页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶与脂肪酶复合体的同源建模与优化 | 第66页 |
| ·GST pull-down | 第66-67页 |
| ·酵母双杂交检测 | 第67-70页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶不同区段的模块替换 | 第70-72页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶不同区段的缺失突变 | 第72-73页 |
| ·实验结果 | 第73-84页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶与脂肪酶复合体的三维结构的模拟 | 第73-75页 |
| ·脂肪酶与折叠酶的蛋白相互作用检测-GST pull-down | 第75-76页 |
| ·脂肪酶与折叠酶的蛋白相互作用检测-酵母双杂交 | 第76-80页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶不同区段的模块替换 | 第80-83页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶不同区段的缺失突变 | 第83-84页 |
| ·讨论 | 第84-86页 |
| ·小结 | 第86-87页 |
| 第四章 不动杆菌脂肪酶特异折叠酶关键氨基酸的鉴定 | 第87-108页 |
| ·实验材料 | 第87-89页 |
| ·仪器与试剂 | 第87页 |
| ·菌株与质粒 | 第87页 |
| ·溶液与培养基 | 第87页 |
| ·引物 | 第87-89页 |
| ·实验方法 | 第89-95页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶与脂肪酶复合体的分子动力学模拟 | 第89-90页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶关键互作氨基酸的预测 | 第90-91页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶关键互作氨基酸的定点突变 | 第91-92页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶关键互作氨基酸的定点饱和突变 | 第92-93页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶定点突变体的表达与纯化 | 第93-94页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶定点突变体与脂肪酶的蛋白互作检测 | 第94-95页 |
| ·实验结果 | 第95-105页 |
| ·不同家族脂肪酶特异折叠酶的多序列比对 | 第95页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶关键氨基酸的预测 | 第95-99页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶关键氨基酸的定点突变 | 第99-102页 |
| ·脂肪酶特异折叠酶关键氨基酸的定点饱和突变 | 第102-105页 |
| ·讨论 | 第105-107页 |
| ·小结 | 第107-108页 |
| 第五章 全文结论 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简历 | 第120页 |
