| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 肝癌 | 第11-12页 |
| 1.1.1 肝癌发病趋势 | 第11页 |
| 1.1.2 传统治疗方式 | 第11-12页 |
| 1.2 基因治疗 | 第12-13页 |
| 1.3 精氨酸脱亚氨基酶(ADI) | 第13-15页 |
| 1.4 基因芯片 | 第15-17页 |
| 1.5 论文研究思路与意义 | 第17-18页 |
| 第2章 ADI体外诱导人肝癌细胞凋亡 | 第18-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 质粒、菌种与细胞 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂与试剂盒 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第18-20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.2.1 WB检测细胞中ASS和ADI表达 | 第20-22页 |
| 2.2.2 质粒扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第23-24页 |
| 2.2.4 pcDNA4-ADI质粒转染肝癌细胞测凋亡 | 第24-27页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.3.1 ADI在三种细胞内的表达情况 | 第27-28页 |
| 2.3.2 ADI诱导肝癌细胞凋亡的流式检测结果 | 第28-30页 |
| 第3章 基因芯片检测基因表达水平变化 | 第30-34页 |
| 3.1 样品准备 | 第30-31页 |
| 3.1.1 样本准备应该遵循的基本原则 | 第30页 |
| 3.1.2 样本准备的方法 | 第30-31页 |
| 3.2 样品抽提与质检 | 第31-32页 |
| 3.3 芯片实验 | 第32-33页 |
| 3.4 分析结果与研究通路选择 | 第33-34页 |
| 第4章 凋亡通路的检测 | 第34-60页 |
| 4.1 凋亡通路real-time PCR验证 | 第34-37页 |
| 4.1.1 样品RNA的抽提 | 第34-35页 |
| 4.1.2 RNA质量检测 | 第35页 |
| 4.1.3 RNA反转为cDNA | 第35页 |
| 4.1.4 real time-PCR | 第35-37页 |
| 4.2 凋亡通路的WB检测 | 第37-38页 |
| 4.2.1 质粒与细胞 | 第37页 |
| 4.2.2 所用抗体 | 第37-38页 |
| 4.2.3 WB实验过程 | 第38页 |
| 4.3 ADI与FTL相互作用 | 第38-49页 |
| 4.3.1 酵母双杂交 | 第38-46页 |
| 4.3.2 免疫共沉淀 | 第46-48页 |
| 4.3.3 免疫荧光共定位 | 第48-49页 |
| 4.4 线粒体损伤检测(MPTP实验) | 第49-51页 |
| 4.4.1 实验原理 | 第49-50页 |
| 4.4.2 实验过程 | 第50-51页 |
| 4.5 Caspase3和Caspase9活性检测 | 第51-52页 |
| 4.6 实验结果与分析 | 第52-60页 |
| 4.6.1 real-time PCR检测结果 | 第52-53页 |
| 4.6.2 WB检测结果 | 第53-54页 |
| 4.6.3 蛋白相互作用结果分析 | 第54-57页 |
| 4.6.4 MPTP实验检测结果 | 第57-58页 |
| 4.6.5 Caspase3和Caspase9活性检测结果 | 第58-59页 |
| 4.6.6 凋亡通路结果总结 | 第59-60页 |
| 第5章 自噬通路的检测 | 第60-66页 |
| 5.1 自噬通路的real-time PCR检测 | 第60-61页 |
| 5.1.1 real-time PCR primer | 第60-61页 |
| 5.1.2 real-time PCR实验过程 | 第61页 |
| 5.2 自噬通路的WB检测 | 第61页 |
| 5.2.1 所用抗体 | 第61页 |
| 5.2.2 WB实验过程 | 第61页 |
| 5.3 WB表明细胞自噬 | 第61-62页 |
| 5.4 荧光显微镜观测自噬小体 | 第62页 |
| 5.4.1 实验过程 | 第62页 |
| 5.5 实验结果与分析 | 第62-66页 |
| 5.5.1 real-time PCR检测结果 | 第62-63页 |
| 5.5.2 WB检测结果 | 第63-64页 |
| 5.5.3 LC3蛋白表达变化结果 | 第64页 |
| 5.5.4 荧光显微镜观测自噬小体结果 | 第64-65页 |
| 5.5.5 自噬通路结果总结 | 第65-66页 |
| 第6章 细胞周期通路检测 | 第66-73页 |
| 6.1 细胞周期通路的real-time PCR验证 | 第66-67页 |
| 6.1.1 real-time PCR primer | 第66-67页 |
| 6.1.2 real-time PCR实验过程 | 第67页 |
| 6.2 细胞周期通路的WB验证 | 第67-68页 |
| 6.2.1 所用抗体 | 第67页 |
| 6.2.2 实验过程 | 第67-68页 |
| 6.3 细胞周期检测 | 第68-69页 |
| 6.3.1 实验原理 | 第68页 |
| 6.3.2 实验过程 | 第68-69页 |
| 6.4 实验结果与分析 | 第69-73页 |
| 6.4.1 real-time PCR检测结果 | 第69页 |
| 6.4.2 WB检测结果 | 第69-70页 |
| 6.4.3 周期阻滞实验结果 | 第70-72页 |
| 6.4.4 细胞周期结果总结 | 第72-73页 |
| 第7章 细胞迁移通路检测 | 第73-79页 |
| 7.1 细胞迁移通路的real-time PCR鉴定 | 第73-74页 |
| 7.1.1 real-time PCR primer | 第73-74页 |
| 7.1.2 real-time PCR实验过程 | 第74页 |
| 7.2 细胞迁移通路的WB验证 | 第74页 |
| 7.2.1 所用抗体 | 第74页 |
| 7.2.2 实验过程 | 第74页 |
| 7.3 活细胞计数验证细胞迁移 | 第74-75页 |
| 7.3.1 实验原理 | 第74-75页 |
| 7.3.2 实验过程 | 第75页 |
| 7.4 实验结果与分析 | 第75-79页 |
| 7.4.1 real-time PCR检测结果 | 第75-76页 |
| 7.4.2 WB检测结果 | 第76-77页 |
| 7.4.3 细胞迁移计数结果 | 第77-78页 |
| 7.4.4 细胞迁移通路总结 | 第78-79页 |
| 第8章 免疫与炎症 | 第79-83页 |
| 8.1 免疫与炎症调控因子的real-time PCR验证 | 第79-80页 |
| 8.1.1 real-time PCR primer | 第79-80页 |
| 8.1.2 real-time PCR实验过程 | 第80页 |
| 8.2 免疫与炎症调控因子的WB验证 | 第80页 |
| 8.2.1 所用抗体 | 第80页 |
| 8.2.2 实验过程 | 第80页 |
| 8.3 实验结果与分析 | 第80-83页 |
| 8.3.1 real-time PCR检测结果 | 第80-81页 |
| 8.3.2 WB检测结果 | 第81-82页 |
| 8.3.3 炎症与免疫通路总结 | 第82-83页 |
| 第9章 总结与展望 | 第83-86页 |
| 9.1 总结 | 第83-85页 |
| 9.2 展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-90页 |
| 已发表和待发表论文 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
