| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 缩略语对照表 | 第7-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 肺癌的现状及其靶向用药 | 第11-14页 |
| 1.1.1 肺癌的现状 | 第11-12页 |
| 1.1.2 肺癌靶向治疗 | 第12-14页 |
| 1.2 EGFR的概述 | 第14-16页 |
| 1.2.1 EGFR的结构及其介导的信号通路 | 第14-15页 |
| 1.2.2 EGFR基因突变检测位点的选取 | 第15-16页 |
| 1.3 目前的检测方法 | 第16-18页 |
| 1.4 金磁微粒及其在生物学领域的应用 | 第18页 |
| 1.5 论文立题依据及主要工作 | 第18-21页 |
| 1.5.1 研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 1.5.3 主要创新点 | 第20-21页 |
| 第二章 EGFR基因阳性质控体系的建立 | 第21-35页 |
| 2.1 肺癌细胞株的培养及其DNA的提取 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验材料、试剂与仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.2 试剂的准备 | 第22页 |
| 2.1.3 细胞株的培养 | 第22-24页 |
| 2.1.4 细胞株DNA的提取 | 第24页 |
| 2.2 阳性克隆的构建 | 第24-32页 |
| 2.2.1 定点突变的原理 | 第24-25页 |
| 2.2.2 实验材料、试剂与仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.3 试剂的准备 | 第26-27页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.3 质控品的测序验证 | 第32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-33页 |
| 2.5 本章小结 | 第33-35页 |
| 第三章 基于金磁微粒E746-A750基因分型系统的建立 | 第35-49页 |
| 3.1 实验原理 | 第35-37页 |
| 3.2 实验仪器、材料与试剂 | 第37-38页 |
| 3.3 实验方法 | 第38-41页 |
| 3.3.1 特异性引物的设计 | 第38-39页 |
| 3.3.2 特异性产物的获取 | 第39-40页 |
| 3.3.3 PCR体系的优化及确定 | 第40页 |
| 3.3.4 金磁微粒层析试纸条检测 | 第40页 |
| 3.3.5 性能评估实验 | 第40-41页 |
| 3.4 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.4.1 突变位点de1746-A750的检测方法(双管Bi-PASA-金磁微粒层析法) | 第41-42页 |
| 3.4.2 引物的筛选 | 第42页 |
| 3.4.3 PCR体系的优化及确定 | 第42-46页 |
| 3.4.4 性能评估 | 第46-47页 |
| 3.5 本章小结 | 第47-49页 |
| 第四章 基于金磁微粒的EGFR基因L858R和T790M突变检测体系的建立 | 第49-61页 |
| 4.1 实验原理 | 第49-50页 |
| 4.2 实验仪器、材料与试剂 | 第50-51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-53页 |
| 4.3.1 特异性引物的设计 | 第51-52页 |
| 4.3.2 特异性产物的获取 | 第52页 |
| 4.3.3 PCR体系的优化及确定 | 第52页 |
| 4.3.4 金磁微粒层析试纸条检测 | 第52-53页 |
| 4.3.5 性能评估实验 | 第53页 |
| 4.4 结果与分析 | 第53-59页 |
| 4.4.1 引物的筛选 | 第53-54页 |
| 4.4.2 PCR体系的优化及确定 | 第54-57页 |
| 4.4.3 性能评估 | 第57-59页 |
| 4.5 本章小结 | 第59-61页 |
| 第五章 NSCLC临床样本的评价 | 第61-71页 |
| 5.1 实验试剂与仪器 | 第61页 |
| 5.2 本章小结 | 第61页 |
| 5.3 样本DNA的提取 | 第61-62页 |
| 5.4 临床样本的检测 | 第62页 |
| 5.5 实验结果 | 第62-69页 |
| 5.5.1 PCR-金磁微粒层析法检测EGFR基因突变 | 第62-64页 |
| 5.5.2 层析结果与直接测序法的比较 | 第64-66页 |
| 5.5.3 qPCR检测方法的验证 | 第66-69页 |
| 5.6 本章小结 | 第69-71页 |
| 总结 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
