| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-13页 |
| 缩略语 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第14-31页 |
| 第一章 亲免蛋白的研究进展 | 第15-21页 |
| 1. 前言 | 第15页 |
| 2 亲免蛋白的结构 | 第15-17页 |
| 3 亲免蛋白的作用及相关机制 | 第17-21页 |
| ·亲免蛋白的PPIase活性和分子伴侣作用 | 第17-18页 |
| ·亲免蛋白与免疫抑制 | 第18-20页 |
| ·亲免蛋白的生理学角色 | 第20-21页 |
| 第二章 FKBPs家族的研究进展 | 第21-27页 |
| 1 FKBPs的分布和生物学特征 | 第21-22页 |
| 2 FKBP12的功能 | 第22-27页 |
| ·FKBP12的结构 | 第22-23页 |
| ·FKBP12的种类及作用机制 | 第23-27页 |
| ·FKBP12与免疫抑制 | 第23-24页 |
| ·FKBP12与离子通道 | 第24-25页 |
| ·FKBP12与细胞周期 | 第25-26页 |
| ·FKBP12与神经退行疾病 | 第26-27页 |
| 第三章 研究展望 | 第27-29页 |
| 第四章 实验设计方案 | 第29-31页 |
| 1 实验目的和意义 | 第29页 |
| 2 研究内容 | 第29-31页 |
| 第二部分 研究论文 | 第31-82页 |
| 第一章 两种家蚕FKBP12基因的获得及生物信息学分析 | 第32-43页 |
| 1 材料与工具 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-34页 |
| ·Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B基因的获得及基因序列分析 | 第32页 |
| ·Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B基因结构分析 | 第32页 |
| ·Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B基因启动子和转录因子分析 | 第32-33页 |
| ·Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B蛋白结构分析 | 第33页 |
| ·Bm-FKBP12蛋白的同源性分析以及进化树的构建 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-42页 |
| ·Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B基因的获得及基因序列分析 | 第34-35页 |
| ·Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B基因结构分析 | 第35-36页 |
| ·Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B基因启动子和转录因子分析 | 第36-37页 |
| ·Bm-FKBP12A和Bm-FKBP12B蛋白结构分析 | 第37-39页 |
| ·Bm-FKBP12蛋白的同源性分析以及进化树的构建 | 第39-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 第二章 Bm-FKBP12B基因的克隆表达纯化及抗体制备 | 第43-63页 |
| 1 试剂与材料 | 第43-48页 |
| 2 实验方法 | 第48-57页 |
| ·家蚕蛹总RNA的提取与cDNA的合成 | 第48页 |
| ·Bm-FKBP12B基因的克隆 | 第48-51页 |
| ·重组pGEX-4T-3-Bm-FKBP12B质粒的筛选与鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组pGEX-4T-3-Bm-FKBP12B质粒的表达与鉴定 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中表达 | 第52-53页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第53页 |
| ·重组GST-Bm-FKBP12B蛋白纯化及样品制备 | 第53-55页 |
| ·样品制备 | 第53-54页 |
| ·GST亲和柱层析纯化GST-Bm-FKBP12B | 第54-55页 |
| ·Bm-FKBP12B蛋白多克隆抗体的制备 | 第55-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-62页 |
| ·家蚕蛹总RNA琼脂糖电泳检测 | 第57-58页 |
| ·PCR扩增Bm-FKBP12B基因的ORF | 第58页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-3-Bm-FKBP12B菌液PCR鉴定结果 | 第58-59页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-3-Bm-FKBP12B的PCR扩增和双酶切鉴定 | 第59页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第59-60页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化结果 | 第60-61页 |
| ·Bm-FKBP12B蛋白多克隆抗体的纯化、及抗体效价测定 | 第61-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 第三章 家蚕两种FKBP12基因的转录水平及表达差异研究 | 第63-74页 |
| 1 材料与试剂 | 第63-64页 |
| 2 方法 | 第64-67页 |
| ·利用家蚕EST数据库分析两种KBP12基因的转录水平 | 第64页 |
| ·通过qRT-PCR分析两个FKBP12基因的转录差异 | 第64-66页 |
| ·各时期及组织RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第64-65页 |
| ·qRT-PCR的引物设计 | 第65页 |
| ·qRT-PCR反应程序 | 第65页 |
| ·qRT-PCR数据分析 | 第65-66页 |
| ·Western blotting检测FKBP12蛋白的表达分布 | 第66-67页 |
| ·家蚕各时期与五龄幼虫各组织蛋白质的抽提 | 第66页 |
| ·Western blotting检测蛋白表达分布情况 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-72页 |
| ·EST数据分析 | 第67-68页 |
| ·qRT-PCR分析 | 第68-71页 |
| ·Western blotting分析 | 第71-72页 |
| 4. 讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 家蚕FKBP12蛋白的亚细胞定位 | 第74-77页 |
| 1 材料与试剂 | 第74页 |
| 2 方法 | 第74-75页 |
| 3 结果与讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 PPIase活性测定 | 第77-79页 |
| 1 材料与试剂 | 第77页 |
| 2 测定方法 | 第77-78页 |
| 3 结果和讨论 | 第78-79页 |
| 第六章 GST Pull-down分析 | 第79-82页 |
| 1 材料与试剂 | 第79页 |
| 2 方法 | 第79-80页 |
| ·GST-Bm-FKBP12B、GST和Hmo1蛋白的诱导表达 | 第79页 |
| ·GST-Bm-FKBP12B和GST蛋白的纯化 | 第79页 |
| ·GST Pull-down分析 | 第79-80页 |
| 3 结果与讨论 | 第80-82页 |
| 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
