| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 缩略语(按照英文首字母顺序排序) | 第14-15页 |
| 第一章 荧光蛋白的结构及变体研究 | 第15-21页 |
| 1 荧光蛋白的结构 | 第15-16页 |
| ·绿色荧光蛋白的结构 | 第15页 |
| ·荧光变体的发色基团 | 第15-16页 |
| 2. 荧光蛋白变体的研究 | 第16-20页 |
| ·通过修改绿色荧光蛋白结构获得新荧光蛋白变体 | 第17-18页 |
| ·从天然生物中分离获得长波长荧光蛋白 | 第18-19页 |
| ·通过基因合成和改造获得荧光蛋白变体 | 第19-20页 |
| 3. 总结 | 第20-21页 |
| 第二章 试验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的和意义 | 第21页 |
| 2 研究的主要内容 | 第21-22页 |
| 3 试验流程图 | 第22-23页 |
| 第三章 荧光蛋白的表达、纯化及性质鉴定 | 第23-60页 |
| (一) 荧光蛋白的克隆与筛选 | 第23-36页 |
| 1 材料 | 第23-24页 |
| ·质粒和菌株 | 第23页 |
| ·试剂及其配制 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-30页 |
| ·荧光蛋白基因的克隆 | 第24-27页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第27-30页 |
| ·氨基酸序列的生物信息学分析 | 第30页 |
| 3 结果 | 第30-34页 |
| ·重组子pET-28a(+)-FP 的鉴定 | 第30-32页 |
| ·荧光蛋白变体基因氨基酸序列的生物信息学分析 | 第32-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| (二) 荧光蛋白表达优化及成熟时间测定 | 第36-44页 |
| 1 试剂及配制 | 第36-38页 |
| ·试剂 | 第36页 |
| ·试剂的配制 | 第36-38页 |
| ·仪器 | 第38页 |
| 2 方法 | 第38-40页 |
| ·目的基因在E.coli 中的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·荧光蛋白成熟时间的测定 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-43页 |
| ·荧光蛋白表达条件的优化 | 第40-42页 |
| ·荧光蛋白成熟时间测定 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| (三) 荧光蛋白的纯化与性质鉴定 | 第44-60页 |
| 1 试剂及配制 | 第44-46页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·试剂的配制 | 第44-46页 |
| 2 方法 | 第46-52页 |
| ·荧光蛋白表达量随时间的关系 | 第46页 |
| ·荧光蛋白的大量表达 | 第46页 |
| ·蛋白纯化的准备 | 第46-47页 |
| ·荧光蛋白的纯化 | 第47-48页 |
| ·荧光蛋白的FPLC 纯化 | 第48-49页 |
| ·蛋白样品的浓缩 | 第49-50页 |
| ·表面增强激光解吸及电离飞行时间质谱测定荧光蛋白的分子量 | 第50页 |
| ·荧光蛋白吸收光谱的测定 | 第50-51页 |
| ·荧光蛋白激发光谱和发射光谱的测定 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-58页 |
| ·荧光蛋白表达量与时间的关系 | 第52页 |
| ·荧光蛋白的纯化 | 第52-55页 |
| ·SELDI-TOF-MS 检测荧光蛋白的分子量 | 第55-56页 |
| ·荧光蛋白的光谱学鉴定 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第四章 荧光蛋白811 的定点诱变、原核表达及其鉴定 | 第60-75页 |
| 1 材料 | 第62页 |
| ·质粒，菌株 | 第62页 |
| ·试剂及配制 | 第62页 |
| 2 方法 | 第62-68页 |
| ·811 定点诱变载体的构建 | 第62-66页 |
| ·811 突变体连接产物的转化与鉴定 | 第66页 |
| ·811 突变体的表达纯化 | 第66页 |
| ·811 突变体吸收光谱的测定 | 第66-67页 |
| ·811 突变体量子产率的测定 | 第67-68页 |
| 3 结果 | 第68-74页 |
| ·811 突变体载体的构建 | 第68-69页 |
| ·811 突变体的鉴定 | 第69-70页 |
| ·811 Ni 柱纯化效果 | 第70-71页 |
| ·811 突变体吸收光谱的测定 | 第71-73页 |
| ·811 突变体量子产率的测定 | 第73-74页 |
| 4 讨论 | 第74-75页 |
| 第五章 荧光蛋白在真核细胞中的表达 | 第75-87页 |
| 1 材料与试剂 | 第75-76页 |
| ·材料 | 第75页 |
| ·试剂 | 第75-76页 |
| 2 方法 | 第76-81页 |
| ·真核载体的构建及鉴定 | 第76-77页 |
| ·HeLa 细胞的培养 | 第77-78页 |
| ·转染 | 第78-80页 |
| ·亚细胞定位 | 第80-81页 |
| 3 结果 | 第81-84页 |
| ·重组载体的构建及鉴定 | 第81-83页 |
| ·荧光蛋白的亚细胞定位 | 第83-84页 |
| 4 讨论 | 第84-87页 |
| 总结与展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 附录 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96页 |