| 缩略表 | 第8-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一部分：肺癌干细胞的提取和验证 | 第13-32页 |
| 1.1 前言 | 第13-14页 |
| 1.2 材料与方法 | 第14-23页 |
| 1.2.1 实验仪器与耗材 | 第14-15页 |
| 1.2.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 1.2.3 细胞培养 | 第16-17页 |
| 1.2.4 单个细胞克隆培养 | 第17页 |
| 1.2.5 肺癌干细胞球囊培养 | 第17页 |
| 1.2.6 细胞免疫荧光 | 第17-18页 |
| 1.2.7 WESTERN BLOT | 第18-21页 |
| 1.2.8 细胞增殖检测 | 第21-22页 |
| 1.2.9 体内成瘤实验 | 第22页 |
| 1.2.10 HE染色 | 第22页 |
| 1.2.11 统计学分析 | 第22-23页 |
| 1.3 结果 | 第23-29页 |
| 1.3.1 肺癌细胞经单个细胞克隆培养形成不同形状的克隆 | 第23页 |
| 1.3.2 全克隆能够分化成不同形状的克隆,具有自我更新潜能 | 第23-26页 |
| 1.3.3 全克隆悬浮培养下形成干细胞球囊 | 第26页 |
| 1.3.4 来源于全克隆的干细胞球囊表达多种干细胞标记 | 第26-28页 |
| 1.3.5 来源于全克隆的干细胞球囊对化疗不敏感 | 第28页 |
| 1.3.6 体内移植瘤实验证实来源于全克隆的干细胞球囊具有干性特征 | 第28-29页 |
| 1.4 讨论 | 第29-31页 |
| 1.5 小结 | 第31-32页 |
| 第二部分：肺癌干细胞促进肿瘤血管生成,并对贝伐单抗治疗耐药 | 第32-49页 |
| 2.1 前言 | 第32-33页 |
| 2.2 材料与方法 | 第33-39页 |
| 2.2.1 实验仪器与耗材 | 第33页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.3 肺癌干细胞与人脐静脉内皮细胞共培养 | 第34页 |
| 2.2.4 细胞增殖检测 | 第34-35页 |
| 2.2.5 细胞迁移实验 | 第35页 |
| 2.2.6 细胞侵袭实验 | 第35-36页 |
| 2.2.7 成管实验 | 第36-37页 |
| 2.2.8 组织切片免疫荧光染色 | 第37页 |
| 2.2.9 免疫组化及微血管计数 | 第37-38页 |
| 2.2.10 体内实验 | 第38页 |
| 2.2.11 统计学分析 | 第38-39页 |
| 2.3 结果 | 第39-46页 |
| 2.3.1 肺癌干细胞主要定位于肿瘤血管周围 | 第39-40页 |
| 2.3.2 肺癌干细胞促进肿瘤血管生成,其移植瘤对贝伐单抗治疗不敏感 | 第40-41页 |
| 2.3.3 肺癌干细胞促进脐静脉内皮细胞增殖,且该促进作用不能被贝伐单抗阻断 | 第41-43页 |
| 2.3.4 肺癌干细胞促进脐静脉内皮细胞迁移,且该促进作用不能被贝伐单抗阻断 | 第43-44页 |
| 2.3.5 肺癌干细胞增强脐静脉内皮细胞的侵袭能力,且该作用不能被贝伐单抗阻断 | 第44-45页 |
| 2.3.6 肺癌干细胞增强脐静脉内皮细胞的成管能力,且该作用不能被贝伐单抗阻断 | 第45-46页 |
| 2.4 讨论 | 第46-48页 |
| 2.5 小结 | 第48-49页 |
| 第三部分：肺癌干细胞微环境中MCP-3大量分泌,促进了血管生成并诱导贝伐单抗治疗耐药；中和MCP-3则抑制肺癌干细胞的促血管生成作用,并逆转贝伐单抗治疗耐药 | 第49-74页 |
| 3.1 前言 | 第49-50页 |
| 3.2 材料与方法 | 第50-59页 |
| 3.2.1 实验仪器与耗材 | 第50-51页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第51-52页 |
| 3.2.3 肺癌干细胞与人脐静脉内皮细胞共培养 | 第52页 |
| 3.2.4 抗体玻璃芯片检测培养基上清中细胞因子的表达水平 | 第52-54页 |
| 3.2.5 细胞RNA提取 | 第54-55页 |
| 3.2.6 cDNA合成 | 第55页 |
| 3.2.7 REAL-TIME PCR | 第55-57页 |
| 3.2.8 细胞增殖检测 | 第57页 |
| 3.2.9 细胞迁移实验 | 第57-58页 |
| 3.2.10 细胞侵袭实验 | 第58页 |
| 3.2.11 成管实验 | 第58-59页 |
| 3.2.12 统计学分析 | 第59页 |
| 3.3 结果 | 第59-70页 |
| 3.3.1 抗体芯片检测共培养的上清中细胞因子表达水平 | 第59-61页 |
| 3.3.2 干细胞球囊共培养上清中MCP-3和ANGIOGENN高表达,VEGF低表达 | 第61-63页 |
| 3.3.3 外源性给予MCP-3,促进内皮细胞的增殖、迁移、侵袭和成管,部分阻断贝伐单抗对内皮细胞上述生物特性的抑制作用 | 第63-67页 |
| 3.3.4 中和肺癌干细胞微环境中MCP-3抑制了内皮细胞的增殖、迁移、侵袭和成管,逆转该微环境中内皮细胞对贝伐单抗治疗耐药 | 第67-70页 |
| 3.4 讨论 | 第70-73页 |
| 3.5 小结 | 第73-74页 |
| 第四部分：肺癌干细胞微环境中PI3K/AKT/MTOR信号通路激活促进MCP-3分泌 | 第74-86页 |
| 4.1 前言 | 第74-75页 |
| 4.2 材料与方法 | 第75-81页 |
| 4.2.1 实验仪器与耗材 | 第75页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第75-76页 |
| 4.2.3 细胞培养和处理 | 第76页 |
| 4.2.4 WESTERN BLOT | 第76-80页 |
| 4.2.5 ELISA检测细胞上清中MCP-3的表达水平 | 第80-81页 |
| 4.2.6 统计学分析 | 第81页 |
| 4.3 结果 | 第81-85页 |
| 4.3.1 肺癌干细胞球囊与内皮细胞共培养促使内皮细胞PI3K/AKT/MTOR通路活化 | 第81-83页 |
| 4.3.2 肺癌干细胞球囊与内皮细胞共培养促使肿瘤细胞PI3K/AKT/MTOR通路活化 | 第83-84页 |
| 4.3.3 抑制MTOR信号通路下调了肺癌干细胞微环境中MCP-3的分泌 | 第84-85页 |
| 4.4 讨论 | 第85-86页 |
| 4.5 小结 | 第86页 |
| 总结 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-96页 |
| 综述 | 第96-114页 |
| 参考文献 | 第106-114页 |
| 致谢 | 第114-116页 |
| 附录 攻读学位期间完成的论文 | 第116页 |
