| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 引言和文献综述 | 第10-19页 |
| 1.1 心脏发育过程的研究 | 第10页 |
| 1.2 心肌肥大的概述 | 第10-11页 |
| 1.3 心脏发育相关的信号传导调控机制研究 | 第11-12页 |
| 1.4 TGF-β信号通路和Smads蛋白家族及其与心肌肥大的关系 | 第12-14页 |
| 1.4.1 TGF-β信号通路 | 第12-13页 |
| 1.4.2 Smads蛋白家族 | 第13-14页 |
| 1.4.3 TGF-β信号途径与心肌肥大的关系 | 第14页 |
| 1.5 蛋白质相互作用的研究方法概述 | 第14-17页 |
| 1.6 RMND5A基因的亚克隆与Smads相互作用关系分析 | 第17页 |
| 1.7 本文的研究意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-33页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 酶类和试剂盒 | 第19页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.3 生物信息学软件 | 第19-20页 |
| 2.1.4 缓冲液和培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.5 其他试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.6 主要实验仪器 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-33页 |
| 2.2.1 PE刺激小鼠肥大模型的的建立 | 第22页 |
| 2.2.2 组织样品RNA抽提 | 第22-23页 |
| 2.2.3 第一条cDNA链的合成 | 第23页 |
| 2.2.4 PCR反应混合液配制 | 第23-24页 |
| 2.2.5 PCR反应 | 第24页 |
| 2.2.6 PCR产物的纯化回收 | 第24-25页 |
| 2.2.7 连接 | 第25页 |
| 2.2.8 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.9 转化(热休克法) | 第25-26页 |
| 2.2.10 质粒的小量制备 | 第26-27页 |
| 2.2.11 阳性克隆的筛选与鉴定 | 第27页 |
| 2.2.12 测序 | 第27页 |
| 2.2.13 原代大鼠心肌细胞的分离与细胞培养 | 第27-29页 |
| 2.2.14 细胞转染 | 第29页 |
| 2.2.15 蛋白的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.16 免疫共沉淀 | 第30-31页 |
| 2.2.17 SDS-PAGE | 第31-32页 |
| 2.2.18 Western blot | 第32-33页 |
| 3 结果与讨论 | 第33-45页 |
| 3.1 结果 | 第33-43页 |
| 3.1.1 RMND5A、RMND5AK1、RMND5AK2、RMND5AK3、RMND5AK4、RMND5AK5的克隆与鉴定 | 第33-36页 |
| 3.1.2 RMND5A及其亚克隆等6个基因真核表达质粒的构建 | 第36-39页 |
| 3.1.3 RMND5A等蛋白与Smad4、Smad6、Smad7的CO-IP实验 | 第39-43页 |
| 3.2 讨论 | 第43-45页 |
| 4 其它工作 | 第45-51页 |
| 4.1 TALEN基因敲除相关工作 | 第45-47页 |
| 4.1.1 TALEN基因敲除操作流程 | 第45-46页 |
| 4.1.2 TALE repeats的融合 | 第46-47页 |
| 4.2 小鼠ZNF382多克隆抗体的制备 | 第47-49页 |
| 4.2.1 ZNF382融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第47-48页 |
| 4.2.2 ZNF382兔多克隆抗体检测 | 第48页 |
| 4.2.3 ZNF382基因蛋白在小鼠成体中的表达 | 第48-49页 |
| 4.3 本节讨论 | 第49-51页 |
| 5 结语 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 附录1 | 第60-61页 |
| 后记 | 第61-62页 |
