| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 前言 | 第7-17页 |
| 1 疫霉菌与植物之间的互作 | 第7-8页 |
| 2 疫霉菌基因功能分析方法 | 第8-13页 |
| 2.1 基因沉默技术 | 第8-9页 |
| 2.2 CRISPR/Cas9基因敲除技术 | 第9-13页 |
| 3 疫霉菌的效应分子 | 第13-17页 |
| 3.1 效应分子的种类 | 第13-14页 |
| 3.2 PcF/SCR类效应分子 | 第14-17页 |
| 材料与方法 | 第17-33页 |
| 1 供试菌株与植物材料 | 第17页 |
| 2 主要质粒载体 | 第17-18页 |
| 3 核酸操作 | 第18-22页 |
| 3.1 基因组DNA的提取 | 第18页 |
| 3.2 总RNA的提取和cDNA合成 | 第18-20页 |
| 3.3 质粒DNA的提取 | 第20-21页 |
| 3.4 DNA片段的回收纯化 | 第21页 |
| 3.5 qPCR分析 | 第21-22页 |
| 4 载体的构建 | 第22-26页 |
| 4.1 常规载体构建 | 第22-24页 |
| 4.2 HDR载体构建 | 第24-25页 |
| 4.3 sgRNA载体构建 | 第25-26页 |
| 5 感受态的制备与转化 | 第26-28页 |
| 5.1 大肠杆菌DH5α | 第26-27页 |
| 5.2 农杆菌GV3101 | 第27-28页 |
| 6 农杆菌介导的瞬时表达分析 | 第28-29页 |
| 7 辣椒疫霉基因的沉默和敲除 | 第29-32页 |
| 7.1 原生质体的转化 | 第29-31页 |
| 7.2 转化子的筛选 | 第31页 |
| 7.3 转化子的致病力分析 | 第31页 |
| 7.4 转化子的形态学性状测定 | 第31-32页 |
| 8 数据统计分析 | 第32-33页 |
| 结果与分析 | 第33-43页 |
| 1 质外体效应分子SCR209编码基因的转录特征 | 第33-34页 |
| 2 SCR209引起植物的细胞死亡 | 第34页 |
| 3 侵染过程中SCR209泌出到植物细胞膜上 | 第34-35页 |
| 4 SCR209是辣椒疫霉致病过程中的毒性因子 | 第35-41页 |
| 4.1 基因沉默 | 第35-37页 |
| 4.2 基因敲除 | 第37-41页 |
| 5 植物中响应SCR209毒性作用的蛋白 | 第41-43页 |
| 讨论 | 第43-46页 |
| 1 PcF/SCR效应分子SCR209编码基因的转录特征 | 第43页 |
| 2 SCR209是辣椒疫霉致病过程中的一个毒性因子 | 第43-44页 |
| 3 SCR209作用的植物靶标 | 第44-46页 |
| 展望 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-57页 |
| 附录一 本论文所使用的培养基及试剂 | 第57-62页 |
| 附录二 本论文所使用的仪器设备 | 第62-63页 |
| 附录三 大豆疫霉C2H2转录因子Ps532154的功能分析 | 第63-72页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
