| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-20页 |
| ·血栓概论 | 第12-13页 |
| ·血栓病的定义 | 第12-13页 |
| ·血栓的形成机制和溶解机制 | 第13页 |
| ·血栓疾病的治疗 | 第13-14页 |
| ·溶血栓药物的评价标准 | 第14-15页 |
| ·纤溶活性高 | 第14页 |
| ·对纤维蛋白的专一性 | 第14页 |
| ·半衰期长 | 第14-15页 |
| ·副作用小 | 第15页 |
| ·价格低廉 | 第15页 |
| ·栓药物的发展 | 第15页 |
| ·微生物来源的溶栓药物 | 第15-18页 |
| ·金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)产生的溶栓酶 | 第16页 |
| ·β-溶血链球菌(Streptococcus hemolyticus)产生的溶栓酶 | 第16页 |
| ·链霉菌(Streptomyces)产生的溶栓酶 | 第16-17页 |
| ·金黄色葡萄球菌产生的纤溶酶 | 第17页 |
| ·纳豆杆菌产生的纤溶酶 | 第17页 |
| ·枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)产生的溶栓菌 | 第17-18页 |
| ·酶的分子生物学研究 | 第18页 |
| ·基因克隆与表达系统的研究进展 | 第18-19页 |
| ·立题意义 | 第19-20页 |
| 第2章 产纤溶酶菌株的筛选与鉴定 | 第20-26页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·土样 | 第20页 |
| ·培养基 | 第20页 |
| ·试剂和仪器 | 第20页 |
| ·试验方法 | 第20-21页 |
| ·具有纤溶活性的菌株筛选 | 第20页 |
| ·BS-3菌落和菌体形态观察与生理生化特性测定 | 第20-21页 |
| ·BS-3菌株总DNA的提取和16S rDNA序列测定 | 第21页 |
| ·16S rDNA序列分析及系统发育树绘制 | 第21页 |
| ·结果与分析 | 第21-25页 |
| ·具有纤溶活性的菌株筛选 | 第21-22页 |
| ·BS-3菌株菌落和菌体形态 | 第22-23页 |
| ·BS-3菌株生理生化特性 | 第23-24页 |
| ·BS-3菌株的16S rDNA测序 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-26页 |
| 第3章 枯草芽孢杆菌BS-3菌株产纤溶酶发酵条件优化 | 第26-32页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·菌株 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·试剂和仪器 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-27页 |
| ·培养方法 | 第26页 |
| ·菌株培养 | 第26-27页 |
| ·纤溶酶活性测定 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-31页 |
| ·尿激酶活力标准曲线 | 第27页 |
| ·发酵培养基组成对发酵液中纤溶酶酶活力的影响 | 第27-28页 |
| ·培养基优化的正交试验 | 第28-29页 |
| ·发酵工艺条件对酶活力的影响 | 第29-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第4章 枯草芽孢杆菌BS-3纤溶酶的分离纯化 | 第32-41页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第32页 |
| ·电泳相关溶液 | 第32-34页 |
| ·试验方法 | 第34-36页 |
| ·BS-3菌株纤溶酶的制备 | 第34-35页 |
| ·等电聚焦电泳测定BS-3菌株粗酶的等电点 | 第35页 |
| ·DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析 | 第35页 |
| ·纤溶酶分离组分的纯度和分子量测定 | 第35-36页 |
| ·转膜与测序 | 第36页 |
| ·纤溶酶比活力测定 | 第36页 |
| ·结果与分析 | 第36-40页 |
| ·BS-3菌株纤溶酶提取 | 第36页 |
| ·等电聚焦电泳测定BS-3菌株纤溶酶的等电点 | 第36-37页 |
| ·DEAE-Sepharose fast flow阴离子交换层析 | 第37-38页 |
| ·纤溶酶分离组分的纯度和分子量测定 | 第38-39页 |
| ·转膜与N-端氨基酸序列测定 | 第39页 |
| ·纤溶酶比活力 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| 第5章 BsFE的酶学性质研究 | 第41-48页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·供试酶 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·试验方法 | 第41-43页 |
| ·纤溶活性成分的确定 | 第41页 |
| ·激酶活性检测 | 第41页 |
| ·BsFE的酶促反应动力学实验 | 第41-42页 |
| ·变性剂对BsFE活性的影响 | 第42页 |
| ·金属离子对BsFE活性的影响 | 第42-43页 |
| ·蛋白酶抑制剂对BsFE纤溶酶活性的影响 | 第43页 |
| ·胰蛋白酶和胃蛋白酶及胆盐对BsFE纤溶酶活性的影响 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-47页 |
| ·纤溶活性成分的确定 | 第43页 |
| ·BsFE激酶活性检测 | 第43-44页 |
| ·BsFE最适温度及温度稳定性 | 第44页 |
| ·BsFE最适pH及pH稳定性 | 第44页 |
| ·BsFE的Km值测定 | 第44-45页 |
| ·变性剂对BsFE活性的影响 | 第45页 |
| ·金属离子对BsFE活性的影响 | 第45-46页 |
| ·蛋白酶抑制剂对BsFE纤溶酶活性的影响 | 第46页 |
| ·胰蛋白酶和胃蛋白酶及胆盐对BsFE纤溶酶活性的影响 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| 第6章 纤溶酶基因bsfe的克隆与表达 | 第48-60页 |
| ·试验材料 | 第48-49页 |
| ·菌株与质粒 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48-49页 |
| ·试验方法 | 第49-54页 |
| ·BS-3菌株基因组DNA的提取 | 第49-50页 |
| ·DNA的纯度检测 | 第50页 |
| ·琼脂糖电泳的检测 | 第50-51页 |
| ·引物设计 | 第51页 |
| ·基因的PCR扩增及纯化 | 第51-52页 |
| ·质粒的提取 | 第52页 |
| ·质粒载体与PCR产物的酶切 | 第52页 |
| ·酶切产物的纯化 | 第52-53页 |
| ·载体与目的片段的连接 | 第53页 |
| ·重组质粒转化宿主菌DH5α | 第53页 |
| ·阳性克隆的筛选与测序 | 第53页 |
| ·重组克隆序列的拼接、比对与分析 | 第53-54页 |
| ·重组克隆pET-30a-bsfe的质粒提取 | 第54页 |
| ·BL 21和ER2566感受态的制备及转化 | 第54页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第54页 |
| ·胞外蛋白的提取和活性检测 | 第54页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE检测 | 第54页 |
| ·表达蛋白的纯化和活性的检测 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-59页 |
| ·BS-3菌株基因组DNA的提取与检测 | 第54-55页 |
| ·引物设计 | 第55页 |
| ·纤溶酶基因BsFE的PCR扩增 | 第55页 |
| ·重组质粒的双酶切检测及阳性克隆的PCR筛选 | 第55-56页 |
| ·重组质粒的测序分析 | 第56页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第56-58页 |
| ·镍柱亲和层析及活性检测 | 第58-59页 |
| ·讨论 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 创新点 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录 | 第67-72页 |
| 附录A | 第67-68页 |
| 附录B | 第68-71页 |
| 附录C | 第71-72页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 学术论文 | 第76-82页 |
