| 中文摘要 | 第17-20页 |
| ABSTRACT | 第20-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第24-38页 |
| 1 谷子概述 | 第24-26页 |
| 1.1 谷子的营养成分 | 第24页 |
| 1.2 小米及米糠提取物抗氧化活性分子的研究 | 第24-25页 |
| 1.3 小米及米糠提取物抗高血糖活性的研究 | 第25页 |
| 1.4 小米及米糠提取物抗真菌及抗肿瘤活性的研究 | 第25-26页 |
| 2 植物蛋白抗肿瘤作用的机制研究 | 第26-36页 |
| 2.1 诱导细胞周期阻滞 | 第29-31页 |
| 2.1.1 细胞周期 | 第29-30页 |
| 2.1.2 植物蛋白抑制肿瘤细胞周期进程的分子机制 | 第30-31页 |
| 2.2 诱导细胞凋亡 | 第31-36页 |
| 2.2.1 细胞凋亡概述 | 第31-32页 |
| 2.2.2 半胱氨酸蛋白酶caspases家族蛋白介导的肿瘤细胞凋亡 | 第32-34页 |
| 2.2.3 活性氧(ROS)介导的肿瘤细胞凋亡 | 第34-36页 |
| 2.3 抑制细胞的浸润和迁移 | 第36页 |
| 3 本课题的研究意义及研究内容 | 第36-38页 |
| 第二章 小米米糠中抗肿瘤活性蛋白的制备及其性质 | 第38-52页 |
| 1 引言 | 第38页 |
| 2 材料及方法 | 第38-46页 |
| 2.1 实验材料及细胞株 | 第38页 |
| 2.2 仪器及试剂 | 第38-41页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第38-39页 |
| 2.2.2 试剂及配制 | 第39-41页 |
| 2.3 谷糠抗肿瘤活性蛋白(FMBP)的分离纯化 | 第41-44页 |
| 2.3.1 谷糠蛋白粗提物的制备 | 第41页 |
| 2.3.2 谷糠活性蛋白(FMBP)的纯化 | 第41-42页 |
| 2.3.3 考马斯亮蓝法测定蛋白浓度 | 第42页 |
| 2.3.4 细胞培养及传代 | 第42-43页 |
| 2.3.5 细胞冻存及复苏 | 第43页 |
| 2.3.6 MTT法检测蛋白组分的体外抗肿瘤活性 | 第43-44页 |
| 2.4 FMBP的质谱鉴定及基因序列分析 | 第44页 |
| 2.4.1 FMBP的MALDI-TOF/TOF质谱鉴定 | 第44页 |
| 2.4.2 用质谱法鉴定FMBP的分子量 | 第44页 |
| 2.5 FMBP的基因序列分析 | 第44-45页 |
| 2.5.1 谷子中总RNA的提取 | 第44-45页 |
| 2.5.2 反转录cDNA | 第45页 |
| 2.5.3 引物设计 | 第45页 |
| 2.5.4 PCR及胶回收 | 第45页 |
| 2.6 FMBP的过氧化物酶活性测定 | 第45-46页 |
| 2.7 数据统计及处理 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-51页 |
| 3.1 FMBP对人结肠癌细胞DLD1增殖的影响 | 第46页 |
| 3.2 FMBP的分离纯化 | 第46-47页 |
| 3.3 FMBP的热稳定性 | 第47-48页 |
| 3.4 FMBP质谱鉴定 | 第48-49页 |
| 3.5 FMBP的分子量鉴定 | 第49页 |
| 3.6 FMBP的基因序列分析 | 第49-50页 |
| 3.7 FMBP过氧化物酶活性分析 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51页 |
| 5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第三章 米糠蛋白FMBP的体外抗结肠癌效应 | 第52-61页 |
| 1 引言 | 第52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-55页 |
| 2.1 细胞株 | 第52页 |
| 2.2 实验仪器及试剂 | 第52-53页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第52页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第52-53页 |
| 2.3 细胞培养 | 第53页 |
| 2.4 MTT法检测FMBP对结肠癌细胞增殖的影响 | 第53页 |
| 2.5 流式细胞仪检测FMBP对细胞周期的影响 | 第53-54页 |
| 2.6 Hochest33342染色法检测FMBP对细胞凋亡的影响 | 第54页 |
| 2.7 Annexin V/碘化丙啶双染法检测FMBP对细胞凋亡的影响 | 第54-55页 |
| 2.8 数据处理及分析 | 第55页 |
| 3 结果 | 第55-60页 |
| 3.1 FMBP对结肠癌细胞增殖的影响 | 第55-57页 |
| 3.2 FMBP对结肠癌DLD1细胞周期的影响 | 第57页 |
| 3.3 Hochest染色法检测FMBP对结肠癌细胞凋亡的影响 | 第57-59页 |
| 3.4 Annexin V/碘化丙啶双染法检测FMBP对结肠癌细胞凋亡的影响 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60页 |
| 5 小结 | 第60-61页 |
| 第四章 米糠蛋白FMBP靶向抗结肠癌效应的分子机制 | 第61-78页 |
| 1 引言 | 第61页 |
| 2 材料与方法 | 第61-66页 |
| 2.1 实验材料及细胞系 | 第61页 |
| 2.2 主要仪器与试剂 | 第61-62页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第61-62页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第62页 |
| 2.2.3 主要试剂配制方法 | 第62页 |
| 2.3 细胞培养 | 第62页 |
| 2.4 FMBP对氧化应激相关指标的检测 | 第62-65页 |
| 2.4.1 FMBP对结肠癌细胞活性氧含量的影响 | 第62-63页 |
| 2.4.2 ROS抑制剂(NAC)对FMBP抑制细胞存活的影响 | 第63页 |
| 2.4.3 FMBP对结肠癌细胞SOD、CAT活性和GSH含量的影响 | 第63-65页 |
| 2.5 流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位的变化 | 第65页 |
| 2.6 Western blotting检测细胞周期蛋白及凋亡相关蛋白的变化 | 第65-66页 |
| 2.7 数据处理及分析 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-75页 |
| 3.1 FMBP对结肠癌细胞活性氧(ROS)含量的影响 | 第66-67页 |
| 3.2 ROS抑制剂(NAC)对FMBP抑制细胞增殖的影响 | 第67-68页 |
| 3.3 FMBP对结肠癌细胞内抗氧化系统(SOD、CAT、GSH)的影响 | 第68-71页 |
| 3.3.1 超氧化物歧化酶(SOD) | 第68-69页 |
| 3.3.2 过氧化氢酶(CAT) | 第69-70页 |
| 3.3.3 谷胱甘肽(GSH) | 第70-71页 |
| 3.4 FMBP处理对DLD1细胞周期的影响 | 第71-72页 |
| 3.5 FMBP对结肠癌细胞线粒体膜电位的影响 | 第72-73页 |
| 3.6 FMBP对半胱氨酸蛋白酶家族蛋白表达量的影响 | 第73-75页 |
| 3.7 FMBP抗结肠癌效应的作用机制 | 第75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 5 小结 | 第77-78页 |
| 第五章 米糠蛋白FMBP抑制结肠癌细胞迁移的作用及机制 | 第78-94页 |
| 1 引言 | 第78页 |
| 2 材料与方法 | 第78-85页 |
| 2.1 实验材料及细胞系 | 第78页 |
| 2.2 主要仪器与试剂 | 第78-79页 |
| 2.2.1 主要仪器(部分仪器在第二章中已列出) | 第78页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第78-79页 |
| 2.2.3 主要试剂的配制 | 第79页 |
| 2.3 细胞培养 | 第79页 |
| 2.4 米糠活性蛋白FMBP的纯化 | 第79-80页 |
| 2.5 MTT法检测FMBP对结肠癌细胞增殖的影响 | 第80页 |
| 2.6 细胞划痕法检测FMBP对结肠癌细胞迁移的影响 | 第80页 |
| 2.7 FMBP对DLD1细胞与基质间粘附的影响 | 第80-81页 |
| 2.8 FMBP对DLD1细胞与细胞间粘附的影响 | 第81页 |
| 2.9 Western blotting检测FMBP对DLD1细胞迁移相关信号通路的影响 | 第81页 |
| 2.10 过表达STAT3慢病毒质粒载体的构建 | 第81-84页 |
| 2.10.1 人结肠癌细胞(SW480)内总RNA的提取 | 第81-82页 |
| 2.10.2 反转录cDNA | 第82页 |
| 2.10.3 引物设计 | 第82页 |
| 2.10.4 PCR及胶回收 | 第82页 |
| 2.10.5 慢病毒pLVX-AcGFP1-N1质粒的转化及提取 | 第82-83页 |
| 2.10.6 构建慢病毒重组质粒pLVX-AcGFP1-N1-STAT3 | 第83页 |
| 2.10.7 重组质粒pLVX-AcGFP1-N1-STAT3的鉴定及提取 | 第83-84页 |
| 2.11 重组慢病毒质粒pLVX-AcGFP1-N1-STAT3转染HEK293T细胞 | 第84页 |
| 2.12 过表达STAT3基因DLD1稳定株的筛选 | 第84-85页 |
| 2.13 数据统计与处理 | 第85页 |
| 3 结果 | 第85-93页 |
| 3.1 FMBP处理对结肠癌细胞迁移的影响 | 第85-86页 |
| 3.2 FMBP通过抑制EMT效应来诱导DLD1的抗迁移效应 | 第86-88页 |
| 3.3 FMBP通过阻断STAT3信号通路诱导DLD1细胞的抗EMT效应 | 第88-89页 |
| 3.4 FMBP能够抑制外源IL-6诱导的STAT3信号通路 | 第89-90页 |
| 3.5 过表达STAT3能够逆转FMBP诱导的DLD1迁移抑制效应 | 第90-91页 |
| 3.6 FMBP抑制intergrin β1介导的细胞与间质粘附来抑制细胞迁移 | 第91-92页 |
| 3.7 FMBP诱导结肠癌细胞抗迁移效应的分子机制 | 第92-93页 |
| 4 讨论 | 第93页 |
| 5 小结 | 第93-94页 |
| 第六章：米糠蛋白FMBP在裸鼠体内的抗结肠癌效应研究 | 第94-102页 |
| 1 引言 | 第94页 |
| 2 材料与方法 | 第94-97页 |
| 2.1 实验动物 | 第94页 |
| 2.2 主要仪器及试剂 | 第94页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第94页 |
| 2.2.2 抗体及试剂 | 第94页 |
| 2.3 细胞培养 | 第94-95页 |
| 2.4 裸鼠结肠癌细胞皮下成瘤模型的建立 | 第95页 |
| 2.5 模型分组及给药 | 第95页 |
| 2.6 Western blotting技术 | 第95页 |
| 2.7 免疫组织化学染色 | 第95-96页 |
| 2.7.1 制作石蜡切片 | 第95-96页 |
| 2.7.2 免疫组织化学染色 | 第96页 |
| 2.8 统计学处理 | 第96-97页 |
| 3 实验结果 | 第97-100页 |
| 3.1 FMBP处理对裸鼠体重的影响 | 第97页 |
| 3.2 FMBP处理对裸鼠皮下肿瘤体积的影响 | 第97-98页 |
| 3.3 免疫组化检测FMBP对肿瘤组织增殖、凋亡相关蛋白表达的影响 | 第98-99页 |
| 3.4 免疫组化检测FMBP对肿瘤组织中细胞迁移相关指标的影响 | 第99-100页 |
| 4 讨论 | 第100-101页 |
| 5 小结 | 第101-102页 |
| 总结与展望 | 第102-104页 |
| 参考文献 | 第104-124页 |
| 附录 缩略表 | 第124-125页 |
| 个人简历及攻读学位期间取得的研究成果 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-130页 |
