| 摘要 | 第4-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第19-42页 |
| 1.1 蛋白质内含子的发现 | 第19-20页 |
| 1.2 蛋白质内含子的结构和分类 | 第20-22页 |
| 1.2.1 蛋白质内含子的分类 | 第20页 |
| 1.2.2 蛋白质内含子的氨基酸编号规则及一级结构 | 第20-22页 |
| 1.2.3 蛋白质内含子的高级结构 | 第22页 |
| 1.3 蛋白质内含子的剪接机制 | 第22-25页 |
| 1.3.1 蛋白质内含子的顺式剪接机制 | 第22-24页 |
| 1.3.2 蛋白质内含子的反式剪接机制 | 第24-25页 |
| 1.4 蛋白质内含子的N端断裂和C端断裂 | 第25-27页 |
| 1.5 蛋白质内含子的应用 | 第27-31页 |
| 1.5.1 蛋白质的纯化 | 第27-28页 |
| 1.5.2 蛋白质环化 | 第28-29页 |
| 1.5.3 在基因治疗中的应用 | 第29页 |
| 1.5.4 毒性蛋白的生产 | 第29-30页 |
| 1.5.5 蛋白质内含子作为分子开关 | 第30页 |
| 1.5.6 蛋白质内含子介导的表达蛋白连接（EPL） | 第30页 |
| 1.5.7 蛋白质特异位点修饰 | 第30-31页 |
| 1.6 蛋白质内含子的定向进化 | 第31-32页 |
| 1.7 国内外研究现状和总结 | 第32-33页 |
| 1.8 本课题研究内容、目的和意义 | 第33-36页 |
| 参考文献 | 第36-42页 |
| 第二章 临近外显子中含有脯氨酸时蛋白质内含子Ssp DnaX的蛋白质剪接 | 第42-63页 |
| 2.1 引言 | 第42-43页 |
| 2.2 材料与方法 | 第43-50页 |
| 2.2.1 实验材料、酶及药品 | 第43-44页 |
| 2.2.2 常用培养基及试剂配制 | 第44-47页 |
| 2.2.2.1 培养基 | 第44页 |
| 2.2.2.2 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE）及Western印记相关试剂缓冲液配制 | 第44-45页 |
| 2.2.2.3 蛋白质纯化用到的试剂 | 第45-46页 |
| 2.2.2.4 DNA电泳用到的溶液 | 第46页 |
| 2.2.2.5 其它试剂 | 第46-47页 |
| 2.2.3 化学转化 | 第47页 |
| 2.2.4 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第47-48页 |
| 2.2.5 质粒的构建 | 第48页 |
| 2.2.6 蛋白质的表达、纯化及体外反应 | 第48-50页 |
| 2.2.6.1 蛋白质的诱导表达 | 第48-49页 |
| 2.2.6.2 蛋白纯化 | 第49页 |
| 2.2.6.3 体外剪接反应 | 第49页 |
| 2.2.6.4 Western印记检测 | 第49-50页 |
| 2.2.7 蛋白质内含子结构的计算机模拟 | 第50页 |
| 2.3 结果 | 第50-57页 |
| 2.3.1 Ssp DnaX, Ter DnaE-3 和Npu DnaE微小蛋白质内含子的体内剪接 | 第50-52页 |
| 2.3.2 Ssp DnaX-S0/S1/S11断裂蛋白质内含子的体内剪接 | 第52-55页 |
| 2.3.2.1 断裂位点的选择 | 第52-53页 |
| 2.3.2.2 体内剪接结果 | 第53-55页 |
| 2.3.3 Ssp DnaX-S0/S1/S11断裂蛋白质内含子的体外剪接 | 第55-57页 |
| 2.4 讨论 | 第57-59页 |
| 2.4.1 Ssp DnaX, Ter DnaE-3 和Npu DnaE微小蛋白质内含子的体内剪接 | 第57页 |
| 2.4.2 Ssp DnaX-S0/S1/S11断裂蛋白质内含子的体内剪接 | 第57-58页 |
| 2.4.3 Ssp DnaX-S0/S1/S11断裂蛋白质内含子的体外剪接 | 第58-59页 |
| 2.5 小结 | 第59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 第三章 蛋白质内含子在特定氨基酸序列中的剪接 | 第63-74页 |
| 3.1 引言 | 第63-64页 |
| 3.2 材料与方法 | 第64-66页 |
| 3.2.1 实验材料、酶及药品 | 第64页 |
| 3.2.2 常用培养基及试剂配制 | 第64页 |
| 3.2.3 化学转化 | 第64页 |
| 3.2.4 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第64-65页 |
| 3.2.5 质粒构建 | 第65页 |
| 3.2.6 蛋白质表达、纯化与剪接 | 第65-66页 |
| 3.3 结果 | 第66-71页 |
| 3.3.1 实验设计 | 第66-67页 |
| 3.3.2 Ssp DnaX和Ter ThyX三种断裂蛋白质内含子（S0/S1/S11）的体内剪接 | 第67-70页 |
| 3.3.2.1 Ssp DnaX和Ter ThyX断裂位点的选择 | 第67-68页 |
| 3.3.2.2 体内剪接结果 | 第68-70页 |
| 3.3.3 Ssp DnaX-S0/S1/S11断裂蛋白质内含子的体外剪接 | 第70-71页 |
| 3.4 讨论 | 第71-72页 |
| 3.4.1 Ssp DnaX和Ter ThyX三种断裂蛋白质内含子（S0/S1/S11）的体内剪接 | 第71页 |
| 3.4.2 Ssp DnaX-S0/S1/S11断裂蛋白质内含子的体外剪接 | 第71-72页 |
| 3.5 小结 | 第72页 |
| 参考文献 | 第72-74页 |
| 第四章 定向进化提高微小蛋白质内含子Ter ThyX剪接活性的研究 | 第74-87页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 材料与方法 | 第74-76页 |
| 4.2.1 实验材料、酶及药品 | 第74-75页 |
| 4.2.2 常用培养基及试剂配制 | 第75页 |
| 4.2.2.1 培养基 | 第75页 |
| 4.2.2.2 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE）及Western印记相关试剂缓冲液配制 | 第75页 |
| 4.2.2.3 DNA电泳用到的溶液 | 第75页 |
| 4.2.2.4 其它试剂 | 第75页 |
| 4.2.3 化学转化 | 第75页 |
| 4.2.4 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第75-76页 |
| 4.2.5 质粒构建 | 第76页 |
| 4.2.6 蛋白质表达 | 第76页 |
| 4.2.7 易错PCR | 第76页 |
| 4.3 结果 | 第76-83页 |
| 4.3.1 实验设计：利用卡那霉素抗性筛选系统的定向进化过程 | 第76-78页 |
| 4.3.2 卡那霉素抗性筛选系统的可行性检测 | 第78-80页 |
| 4.3.2.1 平板菌落计数法计算卡那霉素抗性 | 第78-79页 |
| 4.3.2.2 Western blotting验证剪接效率 | 第79-80页 |
| 4.3.3 Ter ThyX微小蛋白质内含子的定向进化 | 第80-83页 |
| 4.4 讨论 | 第83-84页 |
| 4.4.1 卡那霉素抗性筛选系统的可行性检测 | 第83页 |
| 4.4.2 Ter ThyX微小蛋白质内含子的定向进化 | 第83-84页 |
| 4.5 小结 | 第84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 第五章 S0断裂蛋白质内含子Cne PRP8进化前后比较研究 | 第87-102页 |
| 5.1 引言 | 第87-88页 |
| 5.2 材料与方法 | 第88-90页 |
| 5.2.1 实验材料、酶及药品 | 第88页 |
| 5.2.2 常用培养基及试剂配制 | 第88页 |
| 5.2.3 化学转化 | 第88页 |
| 5.2.4 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第88页 |
| 5.2.5 质粒的构建 | 第88-89页 |
| 5.2.6 蛋白质的表达纯化、体外剪接反应、断裂反应 | 第89-90页 |
| 5.2.7 表面等离子共振（SPR） | 第90页 |
| 5.3 结果 | 第90-98页 |
| 5.3.1 定向进化获得高剪接活性Cne PRP8-E | 第90-91页 |
| 5.3.2 Cne PRP8-S0和Cne PRP8-E-S0剪接动力学 | 第91-94页 |
| 5.3.3 Cne PRP8-E-S0具有高剪接速率的原因分析 | 第94-95页 |
| 5.3.4 Cne PRP8-S0及Cne PRP8-E-S0断裂反应 | 第95-98页 |
| 5.4 讨论 | 第98-99页 |
| 5.4.1 Cne PRP8-S0和Cne PRP8-E-S0剪接动力学 | 第98页 |
| 5.4.2 Cne PRP8-E-S0具有高剪接速率的原因分析 | 第98页 |
| 5.4.3 Cne PRP8-S0及Cne PRP8-E-S0断裂反应 | 第98-99页 |
| 5.5 小结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-102页 |
| 第六章 基于SUMO和S11型断裂蛋白质内含子Ssp GyrB的蛋白质双纯化系统 | 第102-117页 |
| 6.1 引言 | 第102-103页 |
| 6.2 材料与方法 | 第103-108页 |
| 6.2.1 实验材料、酶及药品 | 第103页 |
| 6.2.2 常用培养基及试剂配制 | 第103-105页 |
| 6.2.2.1 培养基 | 第103页 |
| 6.2.2.2 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE）相关试剂缓冲液配制 | 第103-104页 |
| 6.2.2.3 蛋白质纯化用到的试剂 | 第104-105页 |
| 6.2.2.4 DNA电泳用到的溶液 | 第105页 |
| 6.2.2.5 其它试剂 | 第105页 |
| 6.2.3 化学转化 | 第105页 |
| 6.2.4 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第105页 |
| 6.2.5 表达质粒的构建 | 第105-106页 |
| 6.2.6 融合蛋白的表达 | 第106页 |
| 6.2.7 融合蛋白的N端处理 | 第106页 |
| 6.2.8 融合蛋白的C端处理 | 第106-107页 |
| 6.2.9 纯化柱上发生N-cleavage的断裂效率分析 | 第107页 |
| 6.2.10 电子喷雾电离质谱（ESI-MS） | 第107页 |
| 6.2.11 小肽合成 | 第107-108页 |
| 6.3 结果 | 第108-113页 |
| 6.3.1 双纯化系统的设计 | 第108-109页 |
| 6.3.2 纯化柱上发生N-cleavage的断裂效率 | 第109-111页 |
| 6.3.3 双纯化系统纯化蛋白质Trx及MBP | 第111-112页 |
| 6.3.4 电子喷雾电离质谱（ESI-MS）检测末端缺失 | 第112-113页 |
| 6.4 讨论 | 第113-114页 |
| 6.4.1 纯化柱上诱导发生N-cleavage的原因分析 | 第113-114页 |
| 6.4.2 双纯化系统纯化蛋白质Trx及MBP | 第114页 |
| 6.4.3 电子喷雾电离质谱（ESI-MS）检测末端缺失 | 第114页 |
| 6.5 小结 | 第114-115页 |
| 参考文献 | 第115-117页 |
| 第七章 利用蛋白质内含子剪接蓖麻毒蛋白的初步研究 | 第117-132页 |
| 7.1 引言 | 第117-118页 |
| 7.2 材料与方法 | 第118-121页 |
| 7.2.1 实验材料、酶及药品 | 第118页 |
| 7.2.2 常用培养基及试剂配制 | 第118-119页 |
| 7.2.2.1 培养基 | 第118页 |
| 7.2.2.2 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE）及Western印记相关试剂缓冲液配制 | 第118页 |
| 7.2.2.3 蛋白质纯化用到的试剂 | 第118-119页 |
| 7.2.2.4 DNA电泳用到的溶液 | 第119页 |
| 7.2.2.5 其它试剂 | 第119页 |
| 7.2.3 化学转化 | 第119页 |
| 7.2.4 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第119页 |
| 7.2.5 表达质粒的构建 | 第119-120页 |
| 7.2.6 蛋白质的表达纯化 | 第120页 |
| 7.2.7 SUMO酶切 | 第120页 |
| 7.2.8 Fluoroskan Ascent FL 2.5 分析仪测荧光强度 | 第120-121页 |
| 7.3 结果 | 第121-130页 |
| 7.3.1 RicinA毒性与蛋白量的关系 | 第121-126页 |
| 7.3.1.1 pEDHC-RicinA的构建 | 第121页 |
| 7.3.1.2 试剂盒原理及buffer的优化 | 第121-124页 |
| 7.3.1.3 RicinA蛋白纯化 | 第124-125页 |
| 7.3.1.4 RicinA毒性与蛋白量的关系曲线图 | 第125-126页 |
| 7.3.2 RicinA三个突变体的毒性检测 | 第126-127页 |
| 7.3.2.1 RicinAm1, RicinAm2, RicinAm3蛋白纯化 | 第126-127页 |
| 7.3.2.2 毒性检测 | 第127页 |
| 7.3.3 Cne PRP8E-S0断裂蛋白质内含子剪接RicinA | 第127-130页 |
| 7.3.3.1 pEDCH-RicinA-site1/site2的构建 | 第128页 |
| 7.3.3.2 Western blotting检测剪接活性 | 第128-130页 |
| 7.4 讨论 | 第130页 |
| 7.4.1 RicinA毒性与蛋白量的关系及三个突变体毒性检测 | 第130页 |
| 7.4.2 Cne PRP8E-S0断裂蛋白质内含子剪接RicinA | 第130页 |
| 7.5 小结 | 第130页 |
| 参考文献 | 第130-132页 |
| 第八章 利用蛋白质内含子对涤纶织物抗静电整理的研究 | 第132-144页 |
| 8.1 引言 | 第132页 |
| 8.2 材料与方法 | 第132-136页 |
| 8.2.1 实验材料、酶及药品 | 第132-133页 |
| 8.2.2 常用培养基及试剂配制 | 第133-134页 |
| 8.2.2.1 培养基 | 第133页 |
| 8.2.2.2 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE）相关试剂缓冲液配制 | 第133页 |
| 8.2.2.3 蛋白质纯化用到的试剂 | 第133页 |
| 8.2.2.4 DNA电泳用到的溶液 | 第133页 |
| 8.2.2.5 其它试剂 | 第133-134页 |
| 8.2.3 化学转化 | 第134页 |
| 8.2.4 蛋白质凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第134页 |
| 8.2.5 质粒的构建 | 第134页 |
| 8.2.6 蛋白质的表达、纯化及体外反应 | 第134页 |
| 8.2.7 仪器及设备 | 第134-135页 |
| 8.2.8 涤纶织物改性及功能整理 | 第135页 |
| 8.2.9 测试与表征 | 第135-136页 |
| 8.2.9.1 整理后织物的耐水洗牢度测试 | 第135页 |
| 8.2.9.2 整理后织物抗静电性测定 | 第135-136页 |
| 8.2.9.3 整理后织物扫描电镜（SEM）测试 | 第136页 |
| 8.2.9.4 整理后织物回潮率的测定 | 第136页 |
| 8.2.9.5 整理后织物机械性能测试 | 第136页 |
| 8.2.9.6 整理后织物硬挺度测试 | 第136页 |
| 8.3 结果与讨论 | 第136-142页 |
| 8.3.1 MT融合蛋白的合成 | 第136-138页 |
| 8.3.2 织物抗静电性及耐水洗性能 | 第138-139页 |
| 8.3.3 整理后织物SEM | 第139-140页 |
| 8.3.4 整理后织物回潮率 | 第140-141页 |
| 8.3.5 整理后织物机械性能 | 第141页 |
| 8.3.6 整理后织物的硬挺度 | 第141-142页 |
| 8.4 小结 | 第142-143页 |
| 参考文献 | 第143-144页 |
| 第九章 结论与展望 | 第144-147页 |
| 9.1 结论 | 第144-145页 |
| 9.2 展望 | 第145-147页 |
| 博士期间发表论文 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 附录：克隆构建用到的引物 | 第149-151页 |
| 符号说明 | 第151页 |
