| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 前言 | 第13-21页 |
| Ⅰ. 乙肝病毒 | 第13-17页 |
| 病毒基因组及其编码的蛋白 | 第14-15页 |
| 复制周期 | 第15-16页 |
| 急慢性感染及治疗 | 第16-17页 |
| Ⅱ. Ⅰ型干扰素 | 第17-19页 |
| ISG15/USP18信号通路 | 第18-19页 |
| Ⅲ. 巨噬细胞在乙肝病毒感染中的作用 | 第19-21页 |
| 第一部分 ISG15/USP18信号通路对HBV复制的影响 | 第21-53页 |
| 材料与方法 | 第21-33页 |
| 1. 实验材料 | 第21-27页 |
| 1.1 供试材料 | 第21页 |
| 1.2 转染质粒 | 第21页 |
| 1.3 扩增引物 | 第21-22页 |
| 1.4 分子生物学及化学试剂 | 第22-24页 |
| 1.5 缓冲液及试剂配制 | 第24-25页 |
| 1.6 仪器设备及耗材 | 第25-26页 |
| 1.7 分子生物学及统计学软件 | 第26-27页 |
| 2. 实验方法 | 第27-33页 |
| 2.1 质粒转染系统优化及验证 | 第27-31页 |
| 2.2 高表达ISG15/USP18对HBV的影响 | 第31-32页 |
| 2.3 ISG15/USP18对HBV复制的作用是否依赖于ISGylation或USP18酶活性 | 第32-33页 |
| 2.4 ISG15/ USP18对HepG2.2.15细胞中Ⅰ型IFN信号通路及HBV生命周期相关分子的影响 | 第33页 |
| 2.5 外源性Ⅰ型IFN对HepG2.2.1 5细胞中Ⅰ型IFN信号通路及HBV复制的影响 | 第33页 |
| 2.6 数据分析 | 第33页 |
| 实验结果 | 第33-49页 |
| Ⅰ. 质粒转染体系验证及优化 | 第33-36页 |
| 1. 质粒转染剂量的筛选 | 第33-34页 |
| 2. 质粒表达水平验证 | 第34-35页 |
| 3. 质粒pcDNA3.1/USP18C64S表达USP18C64S无酶活性蛋白的验证 | 第35-36页 |
| Ⅱ. ISG15/USP18对肝细胞中HBV产生的影响 | 第36-46页 |
| 1. 高表达ISG15/USP18对HBV复制的影响 | 第36-42页 |
| 1.1 高表达ISG15/USP18对HBV核酸表达的影响 | 第37-39页 |
| 1.2 高表达ISG15/USP18对HBV蛋白表达的影响 | 第39-42页 |
| 2. ISG15/USP18对HBV复制的作用与ISGylation或USP18酶活性的关系 | 第42-46页 |
| 2.1 ISG15刺激HBV复制的效应依赖于ISGylation | 第42-45页 |
| 2.2 USP18对HBV复制的作用与其酶活性无关 | 第45-46页 |
| Ⅲ. ISG15/USP18促进HepG2.2.15细胞中HBV产生的可能机制研究 | 第46-49页 |
| 1. ISG15/ USP18对HepG2.2.15细胞中Ⅰ型IFN信号通路的影响 | 第46-48页 |
| 2. ISG15/ USP18对HepG2.2.15细胞中HBV生命周期相关分子的影响 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-53页 |
| 第二部分 ISG15/USP18信号通路对巨噬细胞极化和功能的影响 | 第53-79页 |
| 材料与方法 | 第53-58页 |
| 1. 实验材料 | 第53-56页 |
| 1.1 供试材料 | 第53页 |
| 1.2 扩增引物 | 第53-54页 |
| 1.3 分子生物学及化学试剂 | 第54-55页 |
| 1.4 缓冲液及试剂配制 | 第55-56页 |
| 1.5 仪器设备 | 第56页 |
| 1.6 分子生物学软件 | 第56页 |
| 2. 实验方法 | 第56-58页 |
| 2.1 THP-1细胞培养 | 第56页 |
| 2.2 THP-1分化及极化 | 第56-57页 |
| 2.3 THP-1分化极化过程中ISG15/USP18表达水平的变化 | 第57页 |
| 2.4 ISG15/USP18转染THP-1巨噬细胞 | 第57页 |
| 2.5 中性红摄取实验 | 第57-58页 |
| 2.6 荧光乳胶微粒吞噬实验 | 第58页 |
| 2.7 活性氧检测(ROS检测) | 第58页 |
| 实验结果 | 第58-75页 |
| Ⅰ. 体外培养巨噬细胞分化和极化体系的建立(THP-1细胞系)及分化极化过程中ISG15/USP18的表达变化 | 第58-64页 |
| 1. THP-1分化(M0巨噬细胞)及验证 | 第58-59页 |
| 2. THP-1极化(M1或M2巨噬细胞)及验证 | 第59-63页 |
| 3. THP-1分化极化过程中ISG15/USP18表达水平的变化 | 第63-64页 |
| Ⅱ. ISG15/USP18对巨噬细胞极化和功能的影响 | 第64-75页 |
| 1. ISG15/USP18质粒在THP-1巨噬细胞中的表达 | 第64-65页 |
| 2. ISG15/USP18对巨噬细胞M1/M2型细胞因子及标志物表达的影响 | 第65-66页 |
| 3. ISG15/USP18对巨噬细胞胞饮功能的影响 | 第66-68页 |
| 4. ISG15/USP18对巨噬细胞吞噬功能的影响 | 第68-71页 |
| 5. ISG15/USP18对巨噬细胞活性氧生成的影响 | 第71-75页 |
| 讨论 | 第75-79页 |
| 第三部分 不同表型巨噬细胞(M1/M2)对肝细胞中干扰素信号通路的影响 | 第79-100页 |
| 材料与方法 | 第79-87页 |
| 1. 实验材料 | 第79-82页 |
| 1.1 供试动物 | 第79页 |
| 1.2 扩增引物 | 第79页 |
| 1.3 分子生物学及化学试剂 | 第79-80页 |
| 1.4 缓冲液、储存液及培养基配制 | 第80-81页 |
| 1.5 仪器设备及耗材 | 第81-82页 |
| 1.6 分子生物学软件 | 第82页 |
| 2. 实验方法及流程 | 第82-87页 |
| 2.1 小鼠腹腔渗出巨噬细胞(PEMs)的诱导及分离 | 第82页 |
| 2.2 小鼠原代肝细胞分离和培养 | 第82-83页 |
| 2.3 小鼠原代肝细胞与小鼠PEMs共培养 | 第83-85页 |
| 2.4 小鼠巨噬细胞置换实验(in vivo) | 第85-87页 |
| 实验结果 | 第87-97页 |
| Ⅰ. 小鼠腹腔渗出巨噬细胞对小鼠原代肝细胞中Ⅰ型干扰素信号通路的影响(transwell co-culture) | 第87-91页 |
| Ⅱ. 小鼠巨噬细胞置换对小鼠肝脏Ⅰ型干扰素信号通路及炎症反应的影响(in vivo) | 第91-97页 |
| 讨论 | 第97-100页 |
| 全文总结与展望 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-110页 |
| 文献综述 Interaction of Kupffer cells/macrophages with Hepatitis B virus | 第110-129页 |
| References | 第122-129页 |
| 英文缩略词 | 第129-133页 |
| 个人简介 | 第133-135页 |
| 致谢 | 第135-136页 |
