| 目录 | 第1-14页 |
| 摘要 | 第14-16页 |
| Abstract | 第16-18页 |
| 绪论 | 第18-36页 |
| 一、神经炎症 | 第18-23页 |
| 1. 小胶质细胞 | 第18-20页 |
| 2. 小胶质细胞与神经元的相互作用 | 第20-23页 |
| 二、神经炎症与中枢神经系统疾病 | 第23-27页 |
| 1. 神经炎症与阿尔茨海默症(Alzheimer's Disease,AD) | 第23-24页 |
| 2. 神经炎症与帕金森症(Parkinson's disease,PD) | 第24-26页 |
| 3. 神经炎症与脑缺血 | 第26-27页 |
| 三、神经炎症与药物成瘾 | 第27页 |
| 四、神经炎症与TLR4 | 第27-30页 |
| 五、神经炎症与NADPH氧化酶 | 第30-32页 |
| 六、神经炎症发生的信号通路 | 第32-34页 |
| 七、立题依据 | 第34-36页 |
| 第一章 PF11对LPS诱导小胶质细胞活化的抑制效应 | 第36-63页 |
| 第一节 概述 | 第36页 |
| 第二节 实验材料 | 第36-39页 |
| 1. 细胞株 | 第36页 |
| 2. 实验动物 | 第36页 |
| 3. 药品与试剂 | 第36-38页 |
| 4. 实验仪器 | 第38-39页 |
| 第三节 实验方法 | 第39-46页 |
| 1. 化合物的来源和配制 | 第39页 |
| 2. N9小鼠小胶质细胞系的培养 | 第39页 |
| 3. 大鼠原代小胶质细胞的分离纯化 | 第39-40页 |
| 4. 大鼠原代小胶质细胞的鉴定 | 第40页 |
| 5. 小胶质细胞的存活率的测定 | 第40-41页 |
| 6. 亚硝酸盐含量的测定 | 第41页 |
| 7. ELISA法检测N9小胶质细胞IL-1β,IL-6,TNF-α和PGE_2释放 | 第41-42页 |
| 8. RT-PCR法考察iNOS,COX-2,IL-1β,IL-6和TNF-α mRNA表达 | 第42-45页 |
| 9. Western blot analysis | 第45-46页 |
| 10. 统计学处理方法 | 第46页 |
| 第四节 实验结果 | 第46-59页 |
| 1. LPS刺激N9小胶质细胞活化模型的建立 | 第46-47页 |
| 2. MTT法检测PF11单独作用及与LPS联合作用对N9小胶质细胞存活率的影响 | 第47-48页 |
| 3. Neutral Red 法检测PF11对N9小胶质细胞存活率的影响 | 第48页 |
| 4. PF11对LPS激活的N9小胶质细胞NO释放的抑制作用 | 第48-49页 |
| 5. PF11对激活的N9小胶质细胞形态学改变的影响 | 第49-50页 |
| 6. 提前或滞后给予PF11的药效比较 | 第50页 |
| 7. 大鼠原代小胶质细胞的分离及鉴定 | 第50-51页 |
| 8. PF11对大鼠原代小胶质细胞存活率的影响 | 第51页 |
| 9. PF11对LPS激活的大鼠原代小胶质细胞NO释放的抑制作用 | 第51-52页 |
| 10. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞iNOS mRNA表达水平的影响 | 第52-53页 |
| 11. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞iNOS蛋白表达水平的影响 | 第53页 |
| 12. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞PGE_2释放的影响 | 第53-54页 |
| 13. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞COX-2mRNA表达水平的影响 | 第54-55页 |
| 14. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞COX-2蛋白表达水平的影响 | 第55页 |
| 15. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞IL-1β释放的影响 | 第55-56页 |
| 16. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞IL-6释放的影响 | 第56-57页 |
| 17. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞TNF-α释放的影响 | 第57页 |
| 18. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞IL-1βmRNA表达水平的影响 | 第57-58页 |
| 19. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞IL-6 mRNA表达水平的影响 | 第58-59页 |
| 20. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞TNF-α mRNA表达水平的影响 | 第59页 |
| 第五节 讨论 | 第59-62页 |
| 小结 | 第62-63页 |
| 第二章 PF11对N9小胶质细胞内TLR4介导的NF-κB,MAPK及Akt信号通路的影响 | 第63-83页 |
| 第一节 概述 | 第63页 |
| 第二节 实验材料 | 第63-65页 |
| 1. 细胞株 | 第63页 |
| 2. 药品与试剂 | 第63-64页 |
| 3. 实验仪器 | 第64-65页 |
| 第三节 实验方法 | 第65-67页 |
| 1. 化合物的来源和配制 | 第65页 |
| 2. 小鼠小胶质细胞系N9的培养 | 第65页 |
| 3. Western-blot analysis | 第65页 |
| 4. 高内涵检测N9小胶质细胞内NF-κB p65亚基核转位 | 第65-66页 |
| 5. 免疫共沉淀 | 第66页 |
| 6. 统计学处理方法 | 第66-67页 |
| 第四节 实验结果 | 第67-78页 |
| 1. 阻断TLR4受体可抑制N9小胶质细胞内TAK1-IKK-NF-κB通路 | 第67-68页 |
| 2. 阻断TLR4受体可抑制N9小胶质细胞内的MAPK信号通路 | 第68-69页 |
| 3. 阻断TLR4受体可抑制N9小胶质细胞内Akt信号通路 | 第69页 |
| 4. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞内MAPKs信号通路蛋白表达的影响 | 第69-71页 |
| 5. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞Akt磷酸化的影响 | 第71-72页 |
| 6. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞内IκBα磷酸化和降解的影响 | 第72-73页 |
| 7. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞NF-κB核转位的影响 | 第73-74页 |
| 8. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞内IKK-α/β及其磷酸化蛋白表达的影响 | 第74-75页 |
| 9. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞内TAK1及其磷酸化蛋白表达的影响 | 第75页 |
| 10. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞IRAK1蛋白表达的影响 | 第75页 |
| 11. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞膜上TLR4蛋白表达的影响 | 第75-76页 |
| 12. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞内MyD88蛋白表达的影响 | 第76-77页 |
| 13. PF11对LPS活化的N9小胶质细胞TLR4与MyD88及TAK1之间相互作用的影响 | 第77-78页 |
| 第五节 讨论 | 第78-82页 |
| 小结 | 第82-83页 |
| 第三章 PF11对LPS活化的N9小胶质细胞内NADPH氧化酶-ROS通路的影响 | 第83-97页 |
| 第一节 概述 | 第83页 |
| 第二节 实验材料 | 第83-84页 |
| 1. 细胞株 | 第83页 |
| 2. 药品与试剂 | 第83-84页 |
| 3. 实验仪器 | 第84页 |
| 第三节 实验方法 | 第84-87页 |
| 1. 化合物的来源和配制 | 第84页 |
| 2. 小鼠小胶质细胞系N9的培养 | 第84页 |
| 3. DPPH·自由基清除作用的测定 | 第84-85页 |
| 4. 细胞内ROS水平的测定 | 第85页 |
| 5. NADPH氧化酶活性测定 | 第85-86页 |
| 6. RT-PCR法考察N9小胶质细胞NADPH氧化酶各亚基的mRNA表达 | 第86页 |
| 7. Western-blot analysis | 第86-87页 |
| 8. Confocal检测N9小胶质细胞内p47phox蛋白膜转位 | 第87页 |
| 9. High Content检测N9小胶质细胞内p67phox蛋白膜转位 | 第87页 |
| 10. 统计学处理方法 | 第87页 |
| 第四节 实验结果 | 第87-94页 |
| 1. PF11对DPPH·自由基的清除作用 | 第87-88页 |
| 2. PF11对LPS激活的N9小胶质细胞ROS释放的影响 | 第88-89页 |
| 3. PF11对LPS激活的NADPH氧化酶活性的影响 | 第89-90页 |
| 4. PF11对LPS激活的N9小胶质细胞NADPH氧化酶各亚基mRNA表达的影响 | 第90-91页 |
| 5. PF11对LPS激活的N9小胶质细胞NADPH氧化酶各亚基蛋白表达的影响 | 第91-94页 |
| 第五节 讨论 | 第94-96页 |
| 小结 | 第96-97页 |
| 第四章 PF11抑制活化的小胶质细胞条件培养液诱导神经元损伤的作用研究 | 第97-117页 |
| 第一节 概述 | 第97页 |
| 第二节 实验材料 | 第97-98页 |
| 1. 细胞株 | 第97页 |
| 2. 实验动物 | 第97-98页 |
| 3. 药品与试剂 | 第98页 |
| 4. 实验仪器 | 第98页 |
| 第三节 实验方法 | 第98-101页 |
| 1. 原代神经元的分离纯化培养及鉴定 | 第98-99页 |
| 2. N9小胶质细胞条件培养液的制备 | 第99-100页 |
| 3. 人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的培养 | 第100页 |
| 4. CCK-8检测神经元细胞的存活率 | 第100页 |
| 5. 免疫细胞化学法检测原代神经元的形态 | 第100页 |
| 6. 统计学处理方法 | 第100-101页 |
| 第四节 实验结果 | 第101-114页 |
| 1. LPS直接作用于神经元对其存活率的影响 | 第101页 |
| 2. 原代小鼠神经元的形态及纯度鉴定 | 第101-102页 |
| 3. PF11单独作用于原代小鼠神经元 | 第102页 |
| 4. LPS条件培养液造成小鼠原代神经元损伤的模型建立 | 第102-103页 |
| 5. PF11对LPS条件培养液造成的小鼠皮层神经元损伤的保护作用 | 第103-104页 |
| 6. PF11-CM对LPS条件培养液造成的小鼠皮层神经元损伤的形态学影响 | 第104-105页 |
| 7. 大鼠原代海马神经元的形态及纯度鉴定 | 第105页 |
| 8. PF11单独作用于大鼠原代海马神经元 | 第105-106页 |
| 9. LPS条件培养液造成大鼠海马神经元损伤的模型建立 | 第106页 |
| 10. PF11对LPS条件培养液造成的大鼠海马神经元损伤的保护作用 | 第106-107页 |
| 11. PF11-CM对LPS条件培养液造成的大鼠海马神经元损伤的形态学影响 | 第107-108页 |
| 12. 大鼠原代皮层神经元的形态及纯度鉴定 | 第108-109页 |
| 13. PF11单独作用于大鼠原代皮层神经元 | 第109页 |
| 14. LPS条件培养液造成大鼠皮层神经元损伤的模型建立 | 第109-110页 |
| 15. PF11对LPS条件培养液造成的大鼠皮层神经元损伤的保护作用 | 第110-111页 |
| 16. PF11对LPS条件培养液造成的大鼠皮层神经元损伤的形态学影响 | 第111-112页 |
| 17. PF11单独作用于SH-SY5Y细胞系对其存活率的影响 | 第112页 |
| 18. LPS条件培养液造成SH-SY5Y细胞损伤的模型建立 | 第112-113页 |
| 19. PF11条件培养液作用于SH-SY5Y细胞系对其存活率的影响 | 第113-114页 |
| 第五节 讨论 | 第114-116页 |
| 小结 | 第116-117页 |
| 第五章 PF11对H_2O_2诱导的神经元氧化损伤的保护作用 | 第117-135页 |
| 第一节 概述 | 第117页 |
| 第二节 实验材料 | 第117-118页 |
| 1. 细胞株 | 第117页 |
| 2. 药品与试剂 | 第117-118页 |
| 3. 实验仪器 | 第118页 |
| 第三节 实验方法 | 第118-121页 |
| 1. 乳酸脱氢酶活力测定 | 第118页 |
| 2. DAPI染色法检测细胞凋亡 | 第118-119页 |
| 3. TUNEL法检测细胞凋亡 | 第119页 |
| 4. MDA含量、SOD和GSH活性测定 | 第119页 |
| 5. 流式细胞术检测细胞周期的变化 | 第119-120页 |
| 6. 流式细胞术检测线粒体膜电位的变化 | 第120页 |
| 7. Western-blot analysis | 第120页 |
| 8. 彗星实验 | 第120-121页 |
| 9. 数据统计 | 第121页 |
| 第四节 实验结果 | 第121-132页 |
| 1. 硝普钠(SNP)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤模型建立 | 第121-122页 |
| 2. PF11对SNP损伤SH-SY5Y细胞存活率的影响 | 第122页 |
| 3. 谷氨酸(L-Glu)诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤模型建立 | 第122-123页 |
| 4. PF11对L-Glu损伤SH-SY5Y细胞存活率的影响 | 第123页 |
| 5. H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞氧化应激损伤模型的建立 | 第123-124页 |
| 6. PF11对H_2O_2损伤SH-SY5Y细胞存活率的影响 | 第124页 |
| 7. PF11对H_2O_2损伤SH-SY5Y细胞形态的影响 | 第124-125页 |
| 8. PF11对H_2O_2诱导SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用 | 第125-126页 |
| 9. PF11对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞核形态变化的影响 | 第126页 |
| 10. TUNEL法检测H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞原位凋亡 | 第126-127页 |
| 11. PF11对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞周期的影响 | 第127-128页 |
| 12. PF11对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞损伤线粒体膜电位的影响 | 第128页 |
| 13. PF11对H_2O_2引起的MDA含量和SOD、GSH-Px活性变化的影响 | 第128-129页 |
| 14. PF11对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞内Bcl-2、Bax、caspase-3及PARP蛋白表达的影响 | 第129-130页 |
| 15. PF11对H_2O_2诱导的SH-SY5Y细胞内死亡受体通路的影响 | 第130-131页 |
| 16. PF11对H_2O_2诱发的SH-SY5Y细胞DNA损伤的影响 | 第131-132页 |
| 第五节 讨论 | 第132-134页 |
| 小结 | 第134-135页 |
| 全文结论 | 第135-136页 |
| 论文创新点 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-145页 |
| 缩略语说明 | 第145-147页 |
| 致谢 | 第147-148页 |
| 攻读博士学位期间发表文章 | 第148-150页 |
| 会议摘要 | 第150-151页 |
| 个人简历 | 第151-152页 |
| 附件1 | 第152-176页 |
| 附件2 | 第176页 |
