| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1 嗜热真菌研究概况及嗜热毁丝霉的木质纤维素降解酶系 | 第13-16页 |
| ·嗜热真菌研究概况 | 第13-14页 |
| ·嗜热毁丝霉的木质纤维素降解酶系 | 第14-16页 |
| 2 锌指蛋白在丝状真菌纤维素酶基因表达调控中的研究概况 .. 4 | 第16-24页 |
| ·锌指蛋白的结构与功能 | 第17-18页 |
| ·丝状真菌中参与纤维素酶基因调控的锌指蛋白类型 | 第18-21页 |
| ·C2H2型锌指蛋白 | 第19页 |
| ·C4型锌指蛋白 | 第19-20页 |
| ·C6型锌指蛋白 | 第20-21页 |
| ·丝状真菌中锌指蛋白在纤维素酶基因的表达调控 | 第21-22页 |
| ·纤维二糖水解酶Ⅰ（CBHⅠ） | 第21-22页 |
| ·纤维二糖水解酶Ⅱ（CBHⅡ） | 第22页 |
| ·锌指蛋白在丝状真菌产纤维素酶中的应用 | 第22-24页 |
| 3 RNA干扰在丝状真菌中应用 | 第24-25页 |
| 4 本文的主要研究内容及意义 | 第25-26页 |
| 第二章 嗜热毁丝霉中葡萄糖分解代谢物阻遏蛋白Cre1 的RNA干扰 | 第26-46页 |
| 1 材料与方法 | 第26-37页 |
| ·材料 | 第26-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·培养基及试剂 | 第26-27页 |
| ·仪器 | 第27-28页 |
| ·寡核苷酸引物 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·设计和合成cre1 的si RNA寡核苷酸片段 | 第29页 |
| ·siRNA寡核苷酸片段的退火 | 第29-30页 |
| ·构建RNA干扰表达盒 | 第30页 |
| ·嗜热毁丝霉的原生质体转化 | 第30-31页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·嗜热毁丝霉总RNA的提取 | 第32页 |
| ·荧光定量PCR | 第32-34页 |
| ·RNA的反转录（RT-PCR） | 第32-33页 |
| ·测定mRNA的相对表达量 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE | 第34页 |
| ·切胶预处理及质谱分析 | 第34页 |
| ·酶活的测定和蛋白分析 | 第34-37页 |
| ·滤纸酶活的测定 | 第35-36页 |
| ·内切 β-1.4-葡萄糖苷酶活的测定 | 第36-37页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活的测定 | 第37页 |
| ·外切 β-1.4-葡萄糖苷酶活测定 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-43页 |
| ·Mtcre1 干扰序列的设计及重组载体构建 | 第37-38页 |
| ·嗜热毁丝霉原生质体转化及阳性转化子筛选 | 第38-40页 |
| ·目的基因cre1 的荧光定量分析 | 第40页 |
| ·酶活测定和总蛋白量分析 | 第40-41页 |
| ·主要纤维素酶基因的荧光定量分析 | 第41-42页 |
| ·原菌与转化子粗酶液差异蛋白质谱的分析 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 第三章 嗜热毁丝霉纤维素酶基因转录调控蛋白Ace1 的RNA干扰 | 第46-59页 |
| 1 材料与方法 | 第46-49页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·菌株与质粒 | 第46页 |
| ·培养基及试剂 | 第46页 |
| ·仪器 | 第46页 |
| ·寡核苷核引物 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-48页 |
| ·设计和合成ace1 的siRNA寡核苷酸片段 | 第47页 |
| ·siRNA寡核苷酸片段退火 | 第47页 |
| ·构建RNA干扰表达盒 | 第47-48页 |
| ·嗜热毁丝霉的原生质体转化 | 第48页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第48页 |
| ·嗜热毁丝霉总RNA的提取 | 第48页 |
| ·荧光定量PCR | 第48页 |
| ·RNA的反转录（RT-RNA） | 第48页 |
| ·测定mRNA的相对表达量 | 第48页 |
| ·SDS-PAGE | 第48页 |
| ·酶活的测定和蛋白质分析 | 第48-49页 |
| ·木聚糖酶活的测定 | 第48-49页 |
| ·滤纸酶活的测定 | 第49页 |
| ·内切 β-1.4-葡萄糖苷酶活的测定 | 第49页 |
| ·β-葡萄糖苷酶活的测定 | 第49页 |
| ·外切 β-1.4-葡萄糖苷酶活测定 | 第49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-57页 |
| ·Mtace1 干扰序列的设计及重组载体构建 | 第49-50页 |
| ·嗜热毁丝霉原生质体转化及阳性转化子筛选 | 第50-52页 |
| ·目的基因ace1 的荧光定量分析 | 第52页 |
| ·酶活测定和总蛋白含量分析 | 第52-54页 |
| ·主要纤维素酶基因的荧光定量分析 | 第54页 |
| ·原菌与转化子粗酶液差异蛋白质谱的分析 | 第54-55页 |
| ·Mtace1 及Mtcre1 重组干扰质粒共转嗜热毁丝霉 | 第55-57页 |
| ·重组子AC8 中酶活性测定和总蛋白量分析 | 第55-57页 |
| ·重组子AC8 中主要纤维素酶基因的荧光定量分析 | 第57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 附录 | 第65-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第69-70页 |
