中文摘要 | 第1-6页 |
Abstract | 第6-13页 |
第1章 综述 | 第13-29页 |
·玉米种子淀粉的合成 | 第13-17页 |
·ADPG 的产生 | 第14-15页 |
·淀粉合成的第一步关键步骤 | 第15页 |
·AGPase 的调节 | 第15页 |
·淀粉的结构 | 第15-17页 |
·直链淀粉的合成 | 第17页 |
·AGPase 基因与启动子RP5 研究进展 | 第17-19页 |
·拟南芥AGPase 大小亚基基因的研究 | 第17-18页 |
·玉米AGPase 大小亚基基因研究 | 第18-19页 |
·水稻胚乳特异启动子RP5 的研究 | 第19页 |
·玉米不同外植体的组织培养 | 第19-23页 |
·玉米幼胚的组织培养 | 第19-21页 |
·玉米成熟胚的组织培养 | 第21页 |
·玉米芽尖、茎尖、节间的组织培养 | 第21-22页 |
·玉米的叶片的组织培养 | 第22页 |
·玉米花药的组织培养 | 第22页 |
·玉米悬浮细胞、原生质体组织培养 | 第22-23页 |
·玉米的遗传转化 | 第23-26页 |
·农杆菌介导法 | 第23-25页 |
·花粉管通道法 | 第25页 |
·基因枪法 | 第25-26页 |
·玉米多基因转化 | 第26-27页 |
·本研究的目的与意义 | 第27-29页 |
第2章 目的基因的克隆与植物表达载体的构建 | 第29-53页 |
·试验材料 | 第29-30页 |
·试验药品 | 第30-32页 |
·试验试剂 | 第30页 |
·试验使用的引物 | 第30-31页 |
·试验中使用的用培养基及溶液 | 第31-32页 |
·试验仪器 | 第32页 |
·试验方法 | 第32-41页 |
·水稻基因组DNA 的提取 | 第32-33页 |
·水稻胚乳特异启动子RP5 克隆 | 第33页 |
·玉米胚乳、拟南芥叶片总RNA 的提取 | 第33-34页 |
·cDNA 第一链的合成 | 第34页 |
·采用RT-PCR 克隆目的基因 | 第34-35页 |
·琼脂糖凝胶目的片段回收 | 第35-36页 |
·目的片段与克隆载体连接 | 第36页 |
·大肠杆菌TOP10 感受态细胞的制备(CaC1_2法) | 第36-37页 |
·重组质粒的转化大肠杆菌感受态细胞 | 第37页 |
·质粒DNA 的提取 | 第37-38页 |
·重组质粒的PCR 鉴定 | 第38-39页 |
·重组质粒的双酶切鉴定 | 第39页 |
·测序 | 第39页 |
·表达载体构建 | 第39-41页 |
·结果 | 第41-50页 |
·DNA 与RNA 的提取、cDNA 的合成 | 第41-43页 |
·胚乳特异启动子和AGPase 基因的克隆 | 第43-50页 |
·讨论 | 第50-53页 |
·AGPase 基因克隆时遇到的问题 | 第50页 |
·启动子的选择 | 第50页 |
·改造载体的选择 | 第50-51页 |
·构建同源和异源基因表达载体 | 第51页 |
·酶切位点的选择 | 第51-53页 |
第3章 玉米遗传转化受体系统的建立 | 第53-69页 |
·试验材料 | 第53-54页 |
·试验药品及仪器 | 第54-55页 |
·试验药品 | 第54页 |
·试验仪器 | 第54-55页 |
·试验方法 | 第55-58页 |
·玉米幼胚愈伤组织受体系统的建立 | 第55-56页 |
·玉米成熟胚根愈伤组织的诱导 | 第56-57页 |
·玉米器官发生受体系统的建立 | 第57-58页 |
·结果 | 第58-64页 |
·基因型与培养基对幼胚愈伤组织诱导的影响 | 第58-59页 |
·取材时间对幼胚愈伤组织诱导的影响 | 第59页 |
·硝酸银对玉米愈伤组织诱导与维持的影响 | 第59-60页 |
·甘露醇和天门冬氨酸对愈伤组织的影响 | 第60-61页 |
·生长激素对愈伤组织分化的影响 | 第61页 |
·不同世代对愈伤组织分化的影响 | 第61-62页 |
·2,4-D 浓度对成熟胚诱导愈伤组织的影响 | 第62-63页 |
·IBA 对玉米胚芽和幼胚分化成苗的影响 | 第63页 |
·6-BA 对玉米幼胚分化的影响 | 第63-64页 |
·矮壮素对玉米壮苗的影响 | 第64页 |
·茎尖分化成苗 | 第64页 |
·讨论 | 第64-69页 |
·玉米基因型对愈伤组织的诱导和再生的影响 | 第64-65页 |
·玉米外植体的生理状态及来源对组织培养的影响 | 第65-66页 |
·培养基对玉米组织培养的影响 | 第66-67页 |
·愈伤组织的继代培养 | 第67页 |
·体胚的发生 | 第67-68页 |
·生长激素对不同外植体分化的影响 | 第68-69页 |
第4章 农杆菌介导AGPase 基因遗传转化玉米的研究 | 第69-93页 |
·试验材料 | 第69-70页 |
·菌株与表达载体 | 第69-70页 |
·受体材料 | 第70页 |
·试验药品及仪器设备 | 第70页 |
·药品 | 第70页 |
·仪器设备 | 第70页 |
·试验方法 | 第70-76页 |
·农杆菌的培养 | 第70-72页 |
·农杆菌侵染过程所涉及的培养基配方 | 第72-73页 |
·外植体准备 | 第73-74页 |
·外植体及工程菌抗生素及筛选剂耐受试验 | 第74页 |
·农杆菌介导转化不同的外植体 | 第74-76页 |
·获得的转化植株的分子检测 | 第76页 |
·结果 | 第76-87页 |
·植物表达载体转化 | 第76-79页 |
·抗生素及筛选剂耐受试验 | 第79页 |
·预培养时间对农杆菌侵染的影响 | 第79-80页 |
·侵染时间对农杆菌侵染的影响 | 第80页 |
·农杆菌浓度对不同外植体转化率的影响 | 第80-81页 |
·共培养时间对转化率的影响 | 第81-82页 |
·不同菌株对外植体遗传转化的影响 | 第82-83页 |
·单基因转化和多基因共转化对农杆菌介导遗传转化的影响 | 第83页 |
·不同世代对农杆菌介导遗传转化的影响 | 第83-84页 |
·不同用量菌液与侵染方式对茎尖遗传转化影响 | 第84页 |
·分子检测 | 第84-87页 |
·讨论 | 第87-93页 |
·抗生素与Basta 耐受筛选的必要性 | 第87-88页 |
·预培养时间对农杆菌介导的影响 | 第88页 |
·农杆菌菌株的选择对农杆菌介导的影响 | 第88-89页 |
·菌液OD、侵染时间、共培养时间对遗传转化的影响 | 第89-90页 |
·受体材料对遗传转化的影响 | 第90页 |
·培养基添加物对农杆菌介导转化的影响 | 第90页 |
·抗性筛选对遗传转化的影响 | 第90-91页 |
·获得抗性植株移栽 | 第91页 |
·分子检测 | 第91-93页 |
第5章 花粉管通道法遗传转化AGPase 基因的研究 | 第93-104页 |
·试验材料 | 第93页 |
·试验药品及仪器 | 第93-94页 |
·试验药品 | 第93-94页 |
·试验仪器 | 第94页 |
·试验方法 | 第94-95页 |
·质粒DNA 提取与受体材料的准备 | 第94页 |
·目的基因的导入与田间管理 | 第94-95页 |
·转化后代的筛选和DNA 提取 | 第95页 |
·分子检测 | 第95页 |
·结果 | 第95-101页 |
·转化材料的获得 | 第95-98页 |
·抗性筛选 | 第98页 |
·分子检测结果: | 第98-101页 |
·讨论 | 第101-104页 |
·花粉管通道法的优势 | 第101-102页 |
·影响玉米花粉管遗传转化的因素 | 第102页 |
·抗性筛选时的农药浓度及喷施方法 | 第102-103页 |
·转化后代的变异 | 第103页 |
·田间管理与调查的必要性 | 第103-104页 |
第6章 结论 | 第104-106页 |
参考文献 | 第106-118页 |
附图 | 第118-124页 |
作者简介 | 第124-125页 |
致谢 | 第125页 |