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AGPase基因在玉米中遗传转化的研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第1章 综述第13-29页
   ·玉米种子淀粉的合成第13-17页
     ·ADPG 的产生第14-15页
     ·淀粉合成的第一步关键步骤第15页
     ·AGPase 的调节第15页
     ·淀粉的结构第15-17页
     ·直链淀粉的合成第17页
   ·AGPase 基因与启动子RP5 研究进展第17-19页
     ·拟南芥AGPase 大小亚基基因的研究第17-18页
     ·玉米AGPase 大小亚基基因研究第18-19页
     ·水稻胚乳特异启动子RP5 的研究第19页
   ·玉米不同外植体的组织培养第19-23页
     ·玉米幼胚的组织培养第19-21页
     ·玉米成熟胚的组织培养第21页
     ·玉米芽尖、茎尖、节间的组织培养第21-22页
     ·玉米的叶片的组织培养第22页
     ·玉米花药的组织培养第22页
     ·玉米悬浮细胞、原生质体组织培养第22-23页
   ·玉米的遗传转化第23-26页
     ·农杆菌介导法第23-25页
     ·花粉管通道法第25页
     ·基因枪法第25-26页
   ·玉米多基因转化第26-27页
   ·本研究的目的与意义第27-29页
第2章 目的基因的克隆与植物表达载体的构建第29-53页
   ·试验材料第29-30页
   ·试验药品第30-32页
     ·试验试剂第30页
     ·试验使用的引物第30-31页
     ·试验中使用的用培养基及溶液第31-32页
   ·试验仪器第32页
   ·试验方法第32-41页
     ·水稻基因组DNA 的提取第32-33页
     ·水稻胚乳特异启动子RP5 克隆第33页
     ·玉米胚乳、拟南芥叶片总RNA 的提取第33-34页
     ·cDNA 第一链的合成第34页
     ·采用RT-PCR 克隆目的基因第34-35页
     ·琼脂糖凝胶目的片段回收第35-36页
     ·目的片段与克隆载体连接第36页
     ·大肠杆菌TOP10 感受态细胞的制备(CaC1_2法)第36-37页
     ·重组质粒的转化大肠杆菌感受态细胞第37页
     ·质粒DNA 的提取第37-38页
     ·重组质粒的PCR 鉴定第38-39页
     ·重组质粒的双酶切鉴定第39页
     ·测序第39页
     ·表达载体构建第39-41页
   ·结果第41-50页
     ·DNA 与RNA 的提取、cDNA 的合成第41-43页
     ·胚乳特异启动子和AGPase 基因的克隆第43-50页
   ·讨论第50-53页
     ·AGPase 基因克隆时遇到的问题第50页
     ·启动子的选择第50页
     ·改造载体的选择第50-51页
     ·构建同源和异源基因表达载体第51页
     ·酶切位点的选择第51-53页
第3章 玉米遗传转化受体系统的建立第53-69页
   ·试验材料第53-54页
   ·试验药品及仪器第54-55页
     ·试验药品第54页
     ·试验仪器第54-55页
   ·试验方法第55-58页
     ·玉米幼胚愈伤组织受体系统的建立第55-56页
     ·玉米成熟胚根愈伤组织的诱导第56-57页
     ·玉米器官发生受体系统的建立第57-58页
   ·结果第58-64页
     ·基因型与培养基对幼胚愈伤组织诱导的影响第58-59页
     ·取材时间对幼胚愈伤组织诱导的影响第59页
     ·硝酸银对玉米愈伤组织诱导与维持的影响第59-60页
     ·甘露醇和天门冬氨酸对愈伤组织的影响第60-61页
     ·生长激素对愈伤组织分化的影响第61页
     ·不同世代对愈伤组织分化的影响第61-62页
     ·2,4-D 浓度对成熟胚诱导愈伤组织的影响第62-63页
     ·IBA 对玉米胚芽和幼胚分化成苗的影响第63页
     ·6-BA 对玉米幼胚分化的影响第63-64页
     ·矮壮素对玉米壮苗的影响第64页
     ·茎尖分化成苗第64页
   ·讨论第64-69页
     ·玉米基因型对愈伤组织的诱导和再生的影响第64-65页
     ·玉米外植体的生理状态及来源对组织培养的影响第65-66页
     ·培养基对玉米组织培养的影响第66-67页
     ·愈伤组织的继代培养第67页
     ·体胚的发生第67-68页
     ·生长激素对不同外植体分化的影响第68-69页
第4章 农杆菌介导AGPase 基因遗传转化玉米的研究第69-93页
   ·试验材料第69-70页
     ·菌株与表达载体第69-70页
     ·受体材料第70页
   ·试验药品及仪器设备第70页
     ·药品第70页
     ·仪器设备第70页
   ·试验方法第70-76页
     ·农杆菌的培养第70-72页
     ·农杆菌侵染过程所涉及的培养基配方第72-73页
     ·外植体准备第73-74页
     ·外植体及工程菌抗生素及筛选剂耐受试验第74页
     ·农杆菌介导转化不同的外植体第74-76页
     ·获得的转化植株的分子检测第76页
   ·结果第76-87页
     ·植物表达载体转化第76-79页
     ·抗生素及筛选剂耐受试验第79页
     ·预培养时间对农杆菌侵染的影响第79-80页
     ·侵染时间对农杆菌侵染的影响第80页
     ·农杆菌浓度对不同外植体转化率的影响第80-81页
     ·共培养时间对转化率的影响第81-82页
     ·不同菌株对外植体遗传转化的影响第82-83页
     ·单基因转化和多基因共转化对农杆菌介导遗传转化的影响第83页
     ·不同世代对农杆菌介导遗传转化的影响第83-84页
     ·不同用量菌液与侵染方式对茎尖遗传转化影响第84页
     ·分子检测第84-87页
   ·讨论第87-93页
     ·抗生素与Basta 耐受筛选的必要性第87-88页
     ·预培养时间对农杆菌介导的影响第88页
     ·农杆菌菌株的选择对农杆菌介导的影响第88-89页
     ·菌液OD、侵染时间、共培养时间对遗传转化的影响第89-90页
     ·受体材料对遗传转化的影响第90页
     ·培养基添加物对农杆菌介导转化的影响第90页
     ·抗性筛选对遗传转化的影响第90-91页
     ·获得抗性植株移栽第91页
     ·分子检测第91-93页
第5章 花粉管通道法遗传转化AGPase 基因的研究第93-104页
   ·试验材料第93页
   ·试验药品及仪器第93-94页
     ·试验药品第93-94页
     ·试验仪器第94页
   ·试验方法第94-95页
     ·质粒DNA 提取与受体材料的准备第94页
     ·目的基因的导入与田间管理第94-95页
     ·转化后代的筛选和DNA 提取第95页
     ·分子检测第95页
   ·结果第95-101页
     ·转化材料的获得第95-98页
     ·抗性筛选第98页
     ·分子检测结果:第98-101页
   ·讨论第101-104页
     ·花粉管通道法的优势第101-102页
     ·影响玉米花粉管遗传转化的因素第102页
     ·抗性筛选时的农药浓度及喷施方法第102-103页
     ·转化后代的变异第103页
     ·田间管理与调查的必要性第103-104页
第6章 结论第104-106页
参考文献第106-118页
附图第118-124页
作者简介第124-125页
致谢第125页

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