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牛、猪附红细胞体病诊断方法的建立及粘附机制研究

目录第1-7页
中文摘要第7-9页
Abstract第9-12页
缩略语表第12-13页
缩略语表(续表)第13-14页
1 附红细胞体病研究进展第14-25页
   ·附红细胞体的发现及命名第14页
   ·附红细胞体的分类地位第14-16页
   ·附红细胞体病的临床症状第16-17页
   ·附红细胞体病的流行情况第17-18页
   ·附红细胞体病的诊断方法第18-22页
     ·直接镜检法第18-19页
     ·血清学诊断方法第19-20页
     ·分子生物学诊断方法第20-22页
   ·猪附红细胞体的相关报道蛋白第22-25页
     ·MSG1蛋白第22-23页
     ·HspA1蛋白(Mycoplasma suis DnaK-like protein)第23-24页
     ·无机焦磷酸酶第24页
     ·α烯醇酶第24-25页
2 温氏附红细胞体LAMP检测方法的建立及应用第25-45页
   ·研究的目的与意义第25页
   ·材料与方法第25-33页
     ·菌株、虫株和载体第25-26页
     ·试剂及仪器第26页
     ·主要试剂与溶液的配制第26-27页
     ·温氏附红细胞体及节肢动物全基因组的提取第27-28页
     ·引物的设计第28-29页
     ·温氏附红细胞体PCR、LAMP反应体系及反应条件第29-30页
     ·PCR及LAMP反应产物的鉴定第30页
     ·温氏附红细胞体LAMP反应条件的优化第30-31页
     ·温氏附红细胞体阳性样品PCR扩增产物序列鉴定第31-33页
     ·温氏附红细胞体LAMP、PCR检测方法的应用第33页
     ·温氏附红细胞体16S rRNA全长基因的分析与进化树的建立第33页
   ·结果与分析第33-43页
     ·温氏附红细胞体PCR检测方法的建立第33-35页
     ·温氏附红细胞体LAMP检测方法的建立第35-38页
     ·温氏附红细胞体PCR、LAMP检测方法的应用第38-40页
     ·16S rRNA基因序列分析和进化树的构建第40-43页
   ·讨论第43-45页
3 猪附红细胞体间接ELISA检测方法的建立及初步应用第45-67页
   ·研究的目的与意义第45页
   ·材料与方法第45-55页
     ·菌株和载体第45-46页
     ·试剂及仪器第46-47页
     ·主要试剂与溶液的配制第47-48页
     ·猪附红细胞体基因组的提取第48页
     ·引物的设计第48-49页
     ·猪附红细胞体MSG1蛋白基因的扩增和克隆测序第49页
     ·重组表达质粒的构建第49-50页
     ·猪附红细胞体MSG1蛋白的原核表达第50-52页
     ·原核表达产物的大量提取第52页
     ·Western-blot试验第52-53页
     ·ELISA试验的基本步骤第53页
     ·MSG1-ELISA检测方法的建立及优化第53-55页
   ·结果与分析第55-66页
     ·猪附红细胞体MSG1蛋白基因的克隆第55-56页
     ·猪附红细胞体MSG1蛋白的原核表达第56-60页
     ·重组蛋白MSG1-ELISA检测方法的建立第60-64页
     ·MSG1-ELISA检测方法的初步应用第64-66页
   ·讨论第66-67页
4 猪附红细胞体粘附蛋白的筛选第67-122页
   ·研究的目的与意义第67页
   ·材料与方法第67-83页
     ·菌株、载体和实验动物第67-69页
     ·试剂及仪器第69-70页
     ·主要试剂与溶液的配制第70-71页
     ·猪附红细胞体基因组的提取第71页
     ·引物的设计第71-73页
     ·猪附红细胞体五个蛋白基因以及RpoB基因、GFP基因的扩增和克隆测序第73-76页
     ·密码子优化的碱基点突变试验第76页
     ·猪附红细胞体五个蛋白基因以及RpoB基因重组表达质粒的构建第76-77页
     ·重组蛋白的原核表达及纯化第77-78页
     ·重组蛋白多克隆抗体血清的制备第78-79页
     ·多克隆抗体血清IgG的纯化第79页
     ·生物素标记多抗血清IgG试验第79-80页
     ·猪红细胞膜蛋白成分的制备及大肠杆菌菌膜成分的提取第80-81页
     ·粘附ELISA试验以及粘附抑制试验第81页
     ·血涂片粘附试验第81-82页
     ·五种重组蛋白在大肠杆菌中表达的亚细胞定位分析第82-83页
   ·结果与分析第83-119页
     ·猪附红细胞体五个蛋白基因的PCR扩增及克隆测序第83-85页
     ·猪附红细胞体五个蛋白基因密码子的优化第85-88页
     ·猪附红细胞体五个粘附蛋白基因重组蛋白的原核表达及纯化第88-95页
     ·五种重组蛋白多克隆抗体血清的制备及抗体效价的测定第95页
     ·猪附红细胞体五种多抗血清IgG的纯化及生物素标记第95-98页
     ·生物素标记的多抗血清IgG效价的测定第98-99页
     ·猪附红细胞体五个重组蛋白粘附ELISA试验第99-103页
     ·血涂片粘附试验第103-111页
     ·五种重组蛋白于大肠杆菌中表达的亚细胞定位分析第111-119页
   ·讨论第119-122页
结论第122-123页
参考文献第123-132页
致谢第132-133页
附录第133页

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