目录 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-12页 |
缩略语表 | 第12-13页 |
缩略语表(续表) | 第13-14页 |
1 附红细胞体病研究进展 | 第14-25页 |
·附红细胞体的发现及命名 | 第14页 |
·附红细胞体的分类地位 | 第14-16页 |
·附红细胞体病的临床症状 | 第16-17页 |
·附红细胞体病的流行情况 | 第17-18页 |
·附红细胞体病的诊断方法 | 第18-22页 |
·直接镜检法 | 第18-19页 |
·血清学诊断方法 | 第19-20页 |
·分子生物学诊断方法 | 第20-22页 |
·猪附红细胞体的相关报道蛋白 | 第22-25页 |
·MSG1蛋白 | 第22-23页 |
·HspA1蛋白(Mycoplasma suis DnaK-like protein) | 第23-24页 |
·无机焦磷酸酶 | 第24页 |
·α烯醇酶 | 第24-25页 |
2 温氏附红细胞体LAMP检测方法的建立及应用 | 第25-45页 |
·研究的目的与意义 | 第25页 |
·材料与方法 | 第25-33页 |
·菌株、虫株和载体 | 第25-26页 |
·试剂及仪器 | 第26页 |
·主要试剂与溶液的配制 | 第26-27页 |
·温氏附红细胞体及节肢动物全基因组的提取 | 第27-28页 |
·引物的设计 | 第28-29页 |
·温氏附红细胞体PCR、LAMP反应体系及反应条件 | 第29-30页 |
·PCR及LAMP反应产物的鉴定 | 第30页 |
·温氏附红细胞体LAMP反应条件的优化 | 第30-31页 |
·温氏附红细胞体阳性样品PCR扩增产物序列鉴定 | 第31-33页 |
·温氏附红细胞体LAMP、PCR检测方法的应用 | 第33页 |
·温氏附红细胞体16S rRNA全长基因的分析与进化树的建立 | 第33页 |
·结果与分析 | 第33-43页 |
·温氏附红细胞体PCR检测方法的建立 | 第33-35页 |
·温氏附红细胞体LAMP检测方法的建立 | 第35-38页 |
·温氏附红细胞体PCR、LAMP检测方法的应用 | 第38-40页 |
·16S rRNA基因序列分析和进化树的构建 | 第40-43页 |
·讨论 | 第43-45页 |
3 猪附红细胞体间接ELISA检测方法的建立及初步应用 | 第45-67页 |
·研究的目的与意义 | 第45页 |
·材料与方法 | 第45-55页 |
·菌株和载体 | 第45-46页 |
·试剂及仪器 | 第46-47页 |
·主要试剂与溶液的配制 | 第47-48页 |
·猪附红细胞体基因组的提取 | 第48页 |
·引物的设计 | 第48-49页 |
·猪附红细胞体MSG1蛋白基因的扩增和克隆测序 | 第49页 |
·重组表达质粒的构建 | 第49-50页 |
·猪附红细胞体MSG1蛋白的原核表达 | 第50-52页 |
·原核表达产物的大量提取 | 第52页 |
·Western-blot试验 | 第52-53页 |
·ELISA试验的基本步骤 | 第53页 |
·MSG1-ELISA检测方法的建立及优化 | 第53-55页 |
·结果与分析 | 第55-66页 |
·猪附红细胞体MSG1蛋白基因的克隆 | 第55-56页 |
·猪附红细胞体MSG1蛋白的原核表达 | 第56-60页 |
·重组蛋白MSG1-ELISA检测方法的建立 | 第60-64页 |
·MSG1-ELISA检测方法的初步应用 | 第64-66页 |
·讨论 | 第66-67页 |
4 猪附红细胞体粘附蛋白的筛选 | 第67-122页 |
·研究的目的与意义 | 第67页 |
·材料与方法 | 第67-83页 |
·菌株、载体和实验动物 | 第67-69页 |
·试剂及仪器 | 第69-70页 |
·主要试剂与溶液的配制 | 第70-71页 |
·猪附红细胞体基因组的提取 | 第71页 |
·引物的设计 | 第71-73页 |
·猪附红细胞体五个蛋白基因以及RpoB基因、GFP基因的扩增和克隆测序 | 第73-76页 |
·密码子优化的碱基点突变试验 | 第76页 |
·猪附红细胞体五个蛋白基因以及RpoB基因重组表达质粒的构建 | 第76-77页 |
·重组蛋白的原核表达及纯化 | 第77-78页 |
·重组蛋白多克隆抗体血清的制备 | 第78-79页 |
·多克隆抗体血清IgG的纯化 | 第79页 |
·生物素标记多抗血清IgG试验 | 第79-80页 |
·猪红细胞膜蛋白成分的制备及大肠杆菌菌膜成分的提取 | 第80-81页 |
·粘附ELISA试验以及粘附抑制试验 | 第81页 |
·血涂片粘附试验 | 第81-82页 |
·五种重组蛋白在大肠杆菌中表达的亚细胞定位分析 | 第82-83页 |
·结果与分析 | 第83-119页 |
·猪附红细胞体五个蛋白基因的PCR扩增及克隆测序 | 第83-85页 |
·猪附红细胞体五个蛋白基因密码子的优化 | 第85-88页 |
·猪附红细胞体五个粘附蛋白基因重组蛋白的原核表达及纯化 | 第88-95页 |
·五种重组蛋白多克隆抗体血清的制备及抗体效价的测定 | 第95页 |
·猪附红细胞体五种多抗血清IgG的纯化及生物素标记 | 第95-98页 |
·生物素标记的多抗血清IgG效价的测定 | 第98-99页 |
·猪附红细胞体五个重组蛋白粘附ELISA试验 | 第99-103页 |
·血涂片粘附试验 | 第103-111页 |
·五种重组蛋白于大肠杆菌中表达的亚细胞定位分析 | 第111-119页 |
·讨论 | 第119-122页 |
结论 | 第122-123页 |
参考文献 | 第123-132页 |
致谢 | 第132-133页 |
附录 | 第133页 |