| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-25页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·研究背景 | 第13-23页 |
| ·阿魏酸酯酶概述 | 第13-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第17-20页 |
| ·丝状真菌表达系统 | 第20-21页 |
| ·阿魏酸酯酶的工业化应用 | 第21-23页 |
| ·论文选题的意义及思路 | 第23-25页 |
| ·研究意义 | 第23页 |
| ·论文的研究思路 | 第23-25页 |
| 第2章 黑曲霉 h408 阿魏酸酯酶在毕赤酵母中的异源表达 | 第25-55页 |
| ·试验材料 | 第25-29页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·主要试剂及工具酶 | 第26页 |
| ·培养基及试剂 | 第26-29页 |
| ·试验方法 | 第29-41页 |
| ·黑曲霉 h408 染色体 DNA 的提取 | 第29页 |
| ·黑曲霉 h408 阿魏酸酯酶 A 基因的克隆 | 第29-32页 |
| ·阿魏酸酯酶 A 毕赤酵母表达载体 pPIC9k-Anfae 的构建 | 第32-34页 |
| ·重组质粒 pPIC9K-AnfaeA 转化毕赤酵母 GS115 | 第34-36页 |
| ·重组菌发酵液阿魏酸酯酶活性测定及 SDS-PAGE 分析 | 第36-40页 |
| ·重组阿魏酸酯酶特性研究 | 第40-41页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第41页 |
| ·菌种保藏 | 第41页 |
| ·试验结果 | 第41-52页 |
| ·黑曲霉阿魏酸酯酶 A 全基因的克隆 | 第41-44页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-AnfaeA 的构建 | 第44-46页 |
| ·pPIC9K-AnfaeA 转化毕赤酵母 GS115 | 第46-49页 |
| ·转化子发酵液的阿魏酸酯酶活性测定及 SDS-PAGE 分析 | 第49-51页 |
| ·重组阿魏酸酯酶特性研究 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-55页 |
| 第3章 重组菌发酵条件优化及中试 | 第55-63页 |
| ·试验材料 | 第55页 |
| ·试验方法 | 第55-57页 |
| ·重组菌发酵条件优化 | 第55-56页 |
| ·AnfaeA 重组毕赤酵母菌中试发酵 | 第56-57页 |
| ·试验结果及分析 | 第57-61页 |
| ·重组菌发酵条件优化 | 第57-60页 |
| ·AnfaeA 重组毕赤酵母菌中试发酵 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-63页 |
| 第4章 黑曲霉 h408 阿魏酸酯酶在丝状真菌中的同源表达 | 第63-81页 |
| ·试验材料 | 第63-65页 |
| ·菌种和质粒 | 第63页 |
| ·主要仪器、试剂及工具酶 | 第63-64页 |
| ·培养基及溶液配制方法 | 第64-65页 |
| ·试验方法 | 第65-69页 |
| ·阿魏酸酯酶表达盒融合基因的构建 | 第65-67页 |
| ·黑曲霉原生质体转化体系的建立 | 第67页 |
| ·黑曲霉阿魏酸酯酶原生质体转化 | 第67-68页 |
| ·黑曲霉转化子分子生物学验证 | 第68-69页 |
| ·重组黑曲霉发酵性能研究 | 第69页 |
| ·试验结果及分析 | 第69-79页 |
| ·阿魏酸酯酶表达盒的构建 | 第69-73页 |
| ·黑曲霉原生质体转化体系的建立 | 第73-75页 |
| ·原生质体转化黑曲霉 h408 | 第75-76页 |
| ·重组黑曲霉转化子筛选及鉴定 | 第76-78页 |
| ·重组黑曲霉发酵特性研究 | 第78-79页 |
| ·讨论 | 第79页 |
| ·本章小结 | 第79-81页 |
| 第5章 结论与展望 | 第81-83页 |
| ·结论 | 第81页 |
| ·展望 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第93页 |
