| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-24页 |
| ·牛病毒性腹泻概述 | 第15-19页 |
| ·病原体 | 第15-18页 |
| ·生物学特性 | 第16页 |
| ·基因组结构 | 第16页 |
| ·BVDV编码蛋白及功能 | 第16-18页 |
| ·病原生物型 | 第18-19页 |
| ·牛病毒性腹泻病的流行病学与临床诊断 | 第19-22页 |
| ·流行病学 | 第19页 |
| ·临床诊断 | 第19-22页 |
| ·病毒分离 | 第19-20页 |
| ·病毒中和实验 | 第20页 |
| ·酶联免疫吸附实验 | 第20-21页 |
| ·反转录-多聚链式反应(RT-PCR) | 第21页 |
| ·核酸杂交实验技术 | 第21页 |
| ·免疫荧光技术 | 第21-22页 |
| ·免疫过氧化酶技术(IP)及免疫组织化学(IHC) | 第22页 |
| ·牛病毒性腹泻的防治与根除措施 | 第22-23页 |
| ·研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 牛病毒性腹泻病毒E0蛋白的制备 | 第24-29页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·实验毒株、质粒和细菌株 | 第24页 |
| ·实验动物、细胞 | 第24页 |
| ·血清、抗体 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·试验方法 | 第25-26页 |
| ·目的基因的扩增与重组质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·引物设计和目的基因扩增 | 第25页 |
| ·目的基因的克隆 | 第25-26页 |
| ·重组蛋白的制备及鉴定 | 第26页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化、复性 | 第26页 |
| ·重组蛋白的western blot分析 | 第26页 |
| ·重组蛋白浓度的测定及保存 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-29页 |
| ·目的基因的扩增与重组质粒构建 | 第26-27页 |
| ·重组E0蛋白的表达与纯化 | 第27-28页 |
| ·重组蛋白的western blot结果 | 第28-29页 |
| 第三章 牛病毒性腹泻病毒E0蛋白单抗、多抗制备及其特性鉴定 | 第29-40页 |
| ·动物免疫 | 第29页 |
| ·病毒培养及TCID50的测定 | 第29-35页 |
| ·病毒培养 | 第29页 |
| ·病毒TCID50的测定 | 第29页 |
| ·BVDV BA株的纯化 | 第29页 |
| ·间接ELISA的建立 | 第29-30页 |
| ·骨髓瘤Sp2/0细胞准备 | 第30页 |
| ·饲养层细胞的准备 | 第30-31页 |
| ·脾细胞的制备 | 第31页 |
| ·杂交瘤细胞的融合 | 第31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第31页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆、冻存与复苏 | 第31-32页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆 | 第31-32页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第32页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏 | 第32页 |
| ·单克隆抗体及杂交瘤细胞特性的鉴定 | 第32-34页 |
| ·腹水的制备 | 第32页 |
| ·单克隆抗体的亚型鉴定 | 第32页 |
| ·单克隆抗体中和效价测定 | 第32-33页 |
| ·western blot分析 | 第33页 |
| ·间接免疫荧光 | 第33页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白E0多克隆抗体的制备及其特性鉴定 | 第34-35页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第34页 |
| ·间接免疫荧光检测 | 第34-35页 |
| ·中和实验 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-38页 |
| ·病毒TCID50测定结果 | 第35页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第35页 |
| ·单克隆抗体亚型鉴定 | 第35页 |
| ·单克隆抗体腹水效价的测定 | 第35-36页 |
| ·单抗的中和实验检测结果 | 第36页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第36-37页 |
| ·多克隆抗体的免疫荧光检测结果 | 第37-38页 |
| ·多克隆抗体中和实验结果 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 BVDV实验感染小鼠的研究 | 第40-46页 |
| ·材料与方法 | 第40-41页 |
| ·试剂及主要仪器 | 第40页 |
| ·病毒 | 第40页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| ·动物的准备 | 第40-41页 |
| ·RT-PCR检测 | 第41页 |
| ·病毒分离 | 第41页 |
| ·组织病理的检测 | 第41页 |
| ·免疫组化 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-45页 |
| ·RT-PCR检测结果 | 第41-43页 |
| ·病毒分离 | 第43页 |
| ·组织病理的检测结果 | 第43-44页 |
| ·免疫组化结果 | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| 第五章 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |