| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词表 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-23页 |
| ·猪巴氏杆菌病 | 第13-17页 |
| ·病原学 | 第13页 |
| ·流行病学 | 第13-14页 |
| ·诊断 | 第14-15页 |
| ·防治 | 第15-17页 |
| ·猪传染性萎缩性鼻炎疫苗的研究进展 | 第17-19页 |
| ·灭活苗 | 第17页 |
| ·亚单位疫苗 | 第17-18页 |
| ·基因工程疫苗 | 第18-19页 |
| ·PMT毒素的研究进展 | 第19-23页 |
| ·PMT毒素的一般特性 | 第19页 |
| ·PMT毒素致病机理 | 第19-20页 |
| ·PMT毒素的免疫原性片段研究 | 第20-21页 |
| ·PMT毒素检测方法的研究 | 第21-23页 |
| 2 研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·实验所用菌株、细胞以及质粒 | 第24页 |
| ·酶和试剂 | 第24页 |
| ·主要培养基及其配制 | 第24-25页 |
| ·各种缓冲液的配制 | 第25-26页 |
| ·主要实验仪器 | 第26页 |
| ·引物 | 第26-27页 |
| ·试验动物 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-35页 |
| ·猪多杀性巴氏杆菌的分离及鉴定 | 第27-28页 |
| ·分子生物学基本操作方法 | 第28页 |
| ·重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的诱导表达及表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
| ·表达产物的纯化及Western blot检测 | 第30-31页 |
| ·针对rtoxAN ELISA抗体检测方法的建立 | 第31页 |
| ·PMT毒素的提取 | 第31-32页 |
| ·细胞半数感染量试验(TCID50) | 第32页 |
| ·血清中和试验 | 第32页 |
| ·Bb-toxAN疫苗的制备 | 第32-33页 |
| ·小鼠实验 | 第33-34页 |
| ·本动物实验 | 第34-35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-47页 |
| ·猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定 | 第35-37页 |
| ·猪多杀性巴氏杆菌的分离 | 第35页 |
| ·猪多杀性巴氏杆菌的生化鉴定结果 | 第35页 |
| ·猪多杀性巴氏杆菌的PCR鉴定结果 | 第35-37页 |
| ·重组质粒pET28a-toxAN的构建与鉴定 | 第37-38页 |
| ·免疫原性片段toxAN的克隆与序列分析 | 第37页 |
| ·重组质粒pET28a-toxAN的酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pET28a-toxAN的诱导表达及表达产物的纯化 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pET28a-toxAN的诱导表达和纯化 | 第38页 |
| ·纯化产物的Western blot检测 | 第38-39页 |
| ·针对rtoxAN ELISA抗体检测方法的建立 | 第39页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数的确定 | 第39页 |
| ·阴阳界的确定 | 第39页 |
| ·PMT毒素的半数感染量试验 | 第39-40页 |
| ·试验用疫苗的检验结果 | 第40页 |
| ·乳化效果的检验 | 第40页 |
| ·无菌检验结果 | 第40页 |
| ·小鼠试验 | 第40-42页 |
| ·小鼠的安全性试验 | 第40页 |
| ·小鼠的免疫保护力试验 | 第40-42页 |
| ·本动物试验 | 第42-47页 |
| ·仔猪的安全性试验 | 第42页 |
| ·妊娠母猪的安全性试验 | 第42-43页 |
| ·仔猪的免疫保护力试验 | 第43-47页 |
| 5 讨论 | 第47-50页 |
| ·多杀性巴氏杆菌的分离鉴定 | 第47页 |
| ·多杀性巴氏杆菌毒素蛋白的免疫原性研究 | 第47-50页 |
| ·免疫原性片段的选择 | 第48页 |
| ·Bb毒株的选择 | 第48页 |
| ·攻毒方式的选择 | 第48-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
