| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| ·奶牛乳腺炎的研究进展 | 第11-13页 |
| ·奶牛乳腺炎对奶牛产业的危害 | 第11页 |
| ·奶牛乳腺炎的病因及症状 | 第11-12页 |
| ·奶牛乳腺炎的预防及治疗 | 第12-13页 |
| ·无乳链球菌乳腺炎的研究进展 | 第13-15页 |
| ·关于无乳链球菌 | 第13页 |
| ·无乳链球菌乳腺炎疫苗的研究进展 | 第13-15页 |
| ·金黄色葡萄球菌乳腺炎的研究进展 | 第15-16页 |
| ·金黄色葡萄球菌致病性 | 第15页 |
| ·金黄色葡萄球菌乳腺炎疫苗的研究进展 | 第15-16页 |
| ·抗原表位的研究进展 | 第16-18页 |
| ·关于抗原表位 | 第16-17页 |
| ·抗原表位的预测 | 第17-18页 |
| ·研究目的及意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-28页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-28页 |
| ·Sip、GapC基因的克隆表达、纯化 | 第21-24页 |
| ·无乳链球菌W34株基因组的提取 | 第21页 |
| ·引物设计及PCR扩增 | 第21-23页 |
| ·基因的回收与纯化 | 第23页 |
| ·pET-30a(+)质粒的小量制备 | 第23页 |
| ·pET-30a(+)-sip及pET-30a(+)-gapc重组表达质粒的构建及鉴定 | 第23-24页 |
| ·蛋白的表达及纯化 | 第24页 |
| ·pET-30a(+)-rsip-clfa的表达、纯化及免疫原性分析 | 第24-25页 |
| ·Sip及ClfA蛋白B细胞表位分析 | 第24页 |
| ·重组蛋白引物设计及overlapping PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·pE-30 a(+)-rsip-clfa重组表达质粒的构建及鉴定 | 第25页 |
| ·蛋白的表达及纯化 | 第25页 |
| ·rSip-ClfA重组蛋白免疫原性分析 | 第25页 |
| ·蛋白亚单位疫苗免疫效应研究 | 第25-28页 |
| ·实验动物分组 | 第25-26页 |
| ·疫苗的制备 | 第26页 |
| ·免疫程序 | 第26页 |
| ·小鼠免疫血清IgG效价测定 | 第26-27页 |
| ·小鼠免疫血清IgG1/IgG2a含量的测定 | 第27页 |
| ·小鼠免疫血清识别菌体(S.agalactiae或S.aureus)实验 | 第27页 |
| ·免疫血清调理中性粒细胞吞噬试验 | 第27-28页 |
| ·哺乳期小鼠乳腺攻毒实验 | 第28页 |
| ·攻毒程序 | 第28页 |
| ·攻毒后小鼠乳腺细菌回收计数 | 第28页 |
| ·小鼠乳腺病理组织切片 | 第28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-43页 |
| ·sip和GAPC基因的克隆 | 第28-29页 |
| ·PET-30A-SIP及PET-30A-GAPC重组质粒的鉴定 | 第29-30页 |
| ·融合基因RSIP-CLFA的构建 | 第30-33页 |
| ·Sip及ClfA抗原表位的预测结果 | 第30-32页 |
| ·Overlapping PCR结果 | 第32页 |
| ·pET-30a(+)-rsip-clfa重组质粒的鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组蛋白的表达与纯化 | 第33-35页 |
| ·WESTERN BLOT鉴定融合蛋RSIP-CLFA的免疫原性 | 第35页 |
| ·免疫血清IGG测定 | 第35-36页 |
| ·免疫血清IGG型测定 | 第36-38页 |
| ·免疫血清调理中性粒细胞吞噬细菌能力测定 | 第38-39页 |
| ·小鼠乳腺细菌回收计数 | 第39-40页 |
| ·小鼠乳腺病理切片检查 | 第40-43页 |
| ·Sip、GapC免疫组 | 第41-42页 |
| ·嵌合蛋白rSip-ClfA亚单位疫苗免疫组 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-47页 |
| ·奶牛乳腺炎的小鼠模型 | 第43页 |
| ·SIP和GAPC的免疫效果分析 | 第43-44页 |
| ·抗原表位的预测 | 第44页 |
| ·嵌合蛋白对无乳链球菌及金葡菌的双重免疫保护效力 | 第44-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 附录 | 第54页 |
