| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 绪论 | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-27页 |
| 1 miRNA的定义及发现 | 第16-17页 |
| 2 miRNA 的产生机理和作用机制 | 第17-20页 |
| ·miRNA 的产生机理 | 第17-18页 |
| ·miRNA 的作用机制 | 第18-20页 |
| 3 miRNA 的鉴别和分离 | 第20-21页 |
| ·传统方法 | 第20页 |
| ·高通量测序技术 | 第20页 |
| ·小分子 RNA 高通量 Solexa 测序技术原理 | 第20-21页 |
| 4 miRNA 靶基因的检测 | 第21-22页 |
| ·生物信息学预测 | 第21页 |
| ·miRNA 芯片技术 | 第21-22页 |
| ·降解组测序法 | 第22页 |
| 5 植物 miRNA 的生物学功能研究 | 第22-25页 |
| ·miRNA 在植物生长发育过程中的功能 | 第23页 |
| ·miRNA 参与植物激素的信号传导 | 第23-24页 |
| ·miRNA 参与植物的逆境应答 | 第24-25页 |
| ·参与非生物胁迫应答 | 第24-25页 |
| ·参与生物胁迫应答 | 第25页 |
| ·miRNA 参与自身的生物合成途径的调控 | 第25页 |
| 6 本研究的目的意义 | 第25-27页 |
| 第二章 利用 Solexa 技术鉴定油菜新 miRNA | 第27-51页 |
| 1 实验材料与方法 | 第28-30页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-30页 |
| ·RNA 的提取及用于 Solexa 测序的 sRNA 文库和降解组 cDNA 文库构建 | 第28页 |
| ·生物信息学分析 | 第28-29页 |
| ·甘蓝型油菜 miRNAs 的终点 PCR 和实时荧光定量 PCR 分析 | 第29-30页 |
| 2 结果与分析 | 第30-48页 |
| ·利用 Solexa 技术测序甘蓝型油菜 miRNAs | 第30-31页 |
| ·甘蓝型油菜保守 miRNAs 的鉴定 | 第31页 |
| ·芸薹属新候选的 miRNAs | 第31-40页 |
| ·茎环 qRT-PCR 验证甘蓝型油菜 miRNAs | 第40-41页 |
| ·油菜保守 miRNAs 的靶基因 | 第41-46页 |
| ·芸薹属新候选的 miRNA 靶基因 | 第46-48页 |
| 3 讨论 | 第48-51页 |
| 第三章 油菜 Bna-miR1140 基因的分离与过表达分析 | 第51-76页 |
| 1 实验材料与方法 | 第51-66页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·菌株和载体 | 第51页 |
| ·酶、试剂盒和主要的化学试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51-52页 |
| ·方法 | 第52-66页 |
| ·引物设计 | 第52页 |
| ·总 RNA 的提取及纯化 | 第52-53页 |
| ·油菜 RNA 的反转录 | 第53-54页 |
| ·油菜 Bna-miR1140 基因前体片段的克隆 | 第54-57页 |
| ·构建油菜 Bna-miR1140 基因植物过表达载体 | 第57-59页 |
| ·农杆菌 LBA4404 电击感受态制备及 35S::Bna-miR1140 质粒转化农杆菌 | 第59-61页 |
| ·油菜的转化及阳性植株鉴定 | 第61-66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-74页 |
| ·油菜叶、叶柄、茎、根和芽总 RNA 的提取 | 第66页 |
| ·油菜 Bna-miR1140 基因前体片段的获得 | 第66-68页 |
| ·油菜 Bna-miR1140 基因植物过表达载体的构建及农杆菌转化 | 第68-69页 |
| ·过表达载体 35S::Bna-miR1140 转化油菜和转基因苗筛选 | 第69-70页 |
| ·转化 35S::Bna-miR1140 油菜株的 PCR 鉴定 | 第70-71页 |
| ·转化 35S::Bna-miR1140 油菜株 T0 代表型分析 | 第71-73页 |
| ·转化 35S::Bna-miR1140 油菜株 T1 代田间表型分析 | 第73-74页 |
| 3 讨论 | 第74-76页 |
| 第四章 油菜 Bna-miR1140 启动子 miR1140Pro 的克隆与表达模式研究 | 第76-90页 |
| 1 实验材料与方法 | 第76-82页 |
| ·材料 | 第76页 |
| ·植物材料 | 第76页 |
| ·菌株和载体 | 第76页 |
| ·酶、试剂盒和主要的化学试剂 | 第76页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·方法 | 第76-82页 |
| ·引物设计 | 第76-77页 |
| ·油菜基因组 DNA 的提取 | 第77页 |
| ·Bna-miR1140 启动子的克隆 | 第77-79页 |
| ·构建油菜 miR1140 Pro::GUS 植物表达载体 | 第79-81页 |
| ·miR1140 Pro::GUS 质粒转化农杆菌 LBA4404 及农杆菌阳性重组子的鉴定 | 第81页 |
| ·miR1140 Pro::GUS 转化油菜和 T0 代阳性株 PCR 鉴定 | 第81-82页 |
| ·转 miR1140 Pro::GUS 油菜 T1 代阳性株组织化学染色 | 第82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-88页 |
| ·油菜 Bna-miR1140 启动子片段的获得 | 第82-84页 |
| ·油菜 Bna-miR1140 启动子植物表达载体的构建及农杆菌转化 | 第84-86页 |
| ·miR1140 Pro::GUS 转化油菜及 T0 代阳性株的获得 | 第86-88页 |
| ·转 miR1140 Pro::GUS 油菜 T1 代阳性株组织化学染色鉴定 | 第88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 第五章 全文结论和创新点及研究展望 | 第90-92页 |
| 1 主要结论 | 第90页 |
| ·油菜新 miRNAs 及其靶基因的鉴定 | 第90页 |
| ·油菜 Bna-miR1140 基因的分离与过表达 | 第90页 |
| ·油菜 Bna-miR1140 启动子的克隆与调控模式 | 第90页 |
| 2 本项目的特色与创新点 | 第90-91页 |
| 3 研究展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-105页 |
| 附录 | 第105-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120页 |
| 在学期间发表的文章 | 第120-121页 |
| 导师评阅表 | 第121页 |
