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棉花逆境胁迫应答Trihelix转录因子的鉴定及功能分析

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-10页
目录第10-14页
第一部分 文献综述第14-46页
 第一章 植物对非生物胁迫的应答及其抗性机制第14-37页
   ·不同逆境引发的植物生理生化变化第14-16页
     ·高盐胁迫对植物的生理生化的影响第15页
     ·低温胁迫对植物生理的影响第15页
     ·干旱胁迫对植物的生长和代谢的影响第15-16页
     ·重金属胁迫第16页
   ·植物对不同逆境的耐受机制第16-24页
     ·植物耐受高盐胁迫的分子机制第16-19页
     ·植物对低温胁迫的耐受机制第19-21页
     ·植物对干旱胁迫的耐受机制第21-22页
     ·植物对重金属胁迫的耐受机制第22-24页
   ·植物非生物逆境胁迫下诱导的基因表达及产物第24-30页
     ·渗透调节因子第24-27页
     ·胁迫诱导功能蛋白第27-28页
     ·水通道蛋白或水孔蛋白(aquaporin, AQP)第28页
     ·毒性降解酶第28-29页
     ·参与胁迫信号传导的蛋白激酶第29-30页
   ·转录因子在植物逆境信号转导中的作用第30-36页
     ·转录因子的概念及结构特征第31页
     ·植物逆境相关转录因子第31-34页
     ·转录因子在植物抗性改良中的应用第34-36页
   ·植物转录因子与 ABA 介导的逆境信号转导途径的关系第36-37页
 第二章 Trihelix 转录因子家族研究进展第37-45页
   ·Trihelix 转录因子家族第37-40页
     ·Trihelix 结构域特点第37-38页
     ·Trihelix 转录因子的结合元件第38-39页
     ·Trihelix 转录因子的分类第39-40页
   ·Trihelix 转录因子的生物学功能第40-44页
     ·Trihelix 转录因子在生物胁迫中的作用第41-42页
     ·Trihelix 转录因子对胚胎、种子发育中的影响第42页
     ·Trihelix 转录因子在萼片、花瓣发育及开花时间调控的作用第42-43页
     ·Trihelix 转录因子在表皮毛、气孔及叶形发育中的作用第43-44页
   ·展望第44-45页
 论文选题的依据和目的第45-46页
第二部分 论文正文第46-137页
 第一章 非生物胁迫应答的棉花 GhGTs 基因的表达和克隆第46-74页
  前言第46-47页
  第一节 实验材料与方法第47-57页
   ·实验材料第47-48页
     ·植物材料第47页
     ·菌株和质粒第47页
     ·工具酶、分子量标准和试剂盒第47页
     ·主要化学试剂第47页
     ·主要仪器第47-48页
     ·核苷酸和蛋白序列分析软件第48页
     ·基因来源第48页
   ·实验方法第48-50页
     ·材料培养与处理第48页
     ·植物总 RNA 的提取及质量检查第48-49页
     ·植物总 RNA 的质量及浓度检测第49页
     ·cDNA 的制备第49-50页
   ·EST 序列分析和引物合成第50页
   ·RT-PCR 和 Realtime-PCR 分析第50-51页
   ·cDNA 末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA Ends,RACE)第51-54页
     ·3’-RACE第52页
     ·5’-RACE第52-53页
     ·5’-和 3’-RACE 中反转录和扩增所用的通用引物第53页
     ·全长序列 cDNA 扩增第53-54页
   ·PCR 产物的纯化和回收第54-55页
   ·PCR 产物的 T 载体连接反应第55页
   ·重组质粒的热击转化第55页
   ·质粒 DNA 的提取(SDS-碱裂解法)第55-56页
     ·试剂第55页
     ·质粒提取第55-56页
   ·双酶切反应第56页
   ·PCR 产物及酶切产物的凝胶电泳检测第56页
   ·DNA 序列测序第56-57页
  第二节 结果与分析第57-74页
   ·RNA 的提取和鉴定第57页
   ·棉花 EST 序列分析第57-58页
   ·Trihelix 基因在非生物胁迫下的表达谱分析第58-64页
     ·高盐诱导 GT 基因表达分析第58-59页
     ·干旱诱导 GT 基因表达分析第59-60页
     ·低温诱导 GT 基因表达分析第60-61页
     ·ABA 处理下 GT 基因的表达分析第61-62页
     ·非生物胁迫基因表达谱分析小结第62-64页
   ·候选基因的全长 cDNA 克隆第64页
     ·5’-RACE 片断的克隆第64页
     ·3’-RACE 片断的克隆第64页
   ·全长基因的拼接与分析第64-70页
     ·GhGT7 基因第65页
     ·GhGT11 基因第65-66页
     ·GhGT18 基因第66-67页
     ·GhGT23 基因第67-68页
     ·GhGT26 基因第68页
     ·GhGT29 基因第68-69页
     ·GhGT30 基因第69-70页
   ·全长基因的系统进化和同源性分析第70-72页
     ·全长基因的系统进化分析第70-71页
     ·全长基因的同源性分析第71-72页
   ·小结第72-74页
 第二章 棉花 trihelix 转录因子的组织表达特性第74-77页
  第一节 材料与方法第74-75页
   ·植物材料第74页
   ·方法第74-75页
     ·植物材料播种和样品采集第74页
     ·Realtime-PCR 分析第74-75页
  第二节 结果与分析第75-77页
   ·GhGTs 基因的组织表达特异性第75-76页
   ·小结第76-77页
 第三章 Trihelix 转录因子的功能分析第77-93页
  第一节 材料与方法第77-84页
   ·实验材料第77页
   ·实验方法第77-84页
     ·原生质体转录激活活性分析第77-79页
     ·原生质体转录抑制活性分析第79页
     ·棉花 GhGTs 转录因子的亚细胞定位分析第79-80页
     ·棉花 GhGTs 转录因子的 DNA 结合特性研究第80-83页
     ·实验所用引物第83-84页
  第二节 结果与分析第84-93页
   ·棉花 GhGTs 转录因子的转录活性分析第84-86页
     ·GhGTs 转录因子的转录激活活性分析第84-85页
     ·GhGTs 转录因子的转录抑制活性分析第85-86页
   ·GhGTs 转录因子的亚细胞定位分析第86-88页
   ·GhGTs 转录因子的 DNA 结合特性分析第88-91页
   ·小结第91-93页
 第四章 GhGTs 基因的生物学功能研究第93-126页
  第一节 材料与方法第93-97页
   ·实验材料第93页
   ·实验方法第93-97页
     ·植物双元表达载体的构建第93页
     ·植物表达载体的农杆菌转化第93-94页
     ·农杆菌介导的拟南芥转化(花序浸泡法)第94页
     ·转基因拟南芥阳性植株的鉴定第94-95页
     ·转基因拟南芥的表型分析第95-96页
     ·数据统计分析第96页
     ·可能的下游调控基因的分析第96-97页
  第二节 结果与分析第97-126页
   ·GhGTs 转基因拟南芥植株的获得和表达量分析第97-99页
   ·转基因拟南芥的表型分析第99-123页
     ·GhGT11 过表达转基因拟南芥表型分析第99-104页
     ·GhGT18 基因的转拟南芥表型分析第104-112页
     ·GhGT23 基因的转拟南芥表型分析第112-118页
     ·GhGT26 基因的转拟南芥表型分析第118-123页
   ·GhGTs 调控的下游基因分析第123-124页
   ·小结第124-126页
 第五章 讨论与主要结论第126-137页
   ·讨论第126-135页
     ·棉花 trihelix 基因的表达特征第127-128页
     ·棉花 GhGT 基因的克隆第128-129页
     ·棉花 GhGTs 转录因子的组织特异性分析第129-130页
     ·棉花 GhGTs 转录因子的转录活性第130页
     ·棉花 GhGTs 转录因子的亚细胞定位第130-131页
     ·棉花 GhGTs 转录因子的 DNA 结合特异性第131-132页
     ·棉花 GhGTs 转录因子的生物学功能第132-133页
     ·棉花 GhGT23 转录因子可能调控的下游基因分析第133-135页
   ·论文主要结果第135-137页
参考文献第137-152页
致谢第152-153页
附录第153-155页
作者简介第155-156页
导师评阅表第156页

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