重组大肠杆菌表达新型谷胱甘肽合成酶的研究及谷胱甘肽的初步分离纯化
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第1章 前言 | 第9-18页 |
| ·GSH的结构及物理化学性质 | 第9页 |
| ·谷胱甘肽的生理功能和应用 | 第9-10页 |
| ·谷胱甘肽的合成 | 第10-12页 |
| ·溶剂萃取法 | 第10页 |
| ·化学合成法 | 第10页 |
| ·酶法 | 第10-11页 |
| ·发酵法 | 第11-12页 |
| ·谷胱甘肽的检测方法 | 第12页 |
| ·谷胱甘肽的分离方法 | 第12-14页 |
| ·大肠杆菌高密度发酵及蛋白表达 | 第14-16页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-25页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·菌种来源 | 第18页 |
| ·实验仪器与设备 | 第18页 |
| ·实验试剂 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19-20页 |
| ·培养方法 | 第20-21页 |
| ·种子培养 | 第20页 |
| ·摇瓶培养 | 第20-21页 |
| ·5L发酵罐培养 | 第21页 |
| ·一级种子培养 | 第21页 |
| ·级种子培养 | 第21页 |
| ·分批发酵 | 第21页 |
| ·补料分批发酵 | 第21页 |
| ·测定方法 | 第21-25页 |
| ·菌体密度测定 | 第21-22页 |
| ·菌体干重的测定 | 第22页 |
| ·发酵液中葡萄糖的测定 | 第22-23页 |
| ·培养液中还原型谷胱甘肽的测定 | 第23页 |
| ·质粒稳定性检测 | 第23页 |
| ·蛋白定量 | 第23页 |
| ·酶活分析 | 第23-25页 |
| 第3章 重组菌摇瓶培养的生长与表达条件优化 | 第25-37页 |
| ·自诱导培养基重组菌的生长和蛋白表达 | 第25-29页 |
| ·自诱导培养基1菌体生长和蛋白表达 | 第25-27页 |
| ·自诱导培养基2菌体生长蛋白表达 | 第27-29页 |
| ·诱导条件的不同对蛋白和酶活的影响 | 第29-35页 |
| ·不同诱导浓度的影响 | 第29-31页 |
| ·诱导时间实验 | 第31-33页 |
| ·不同初始pH的影响 | 第33-34页 |
| ·不同装液量影响 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-37页 |
| 第4章 5L罐水平上发酵优化 | 第37-47页 |
| ·结果与讨论 | 第37-45页 |
| ·酶活测定方法的选择 | 第37页 |
| ·自诱导培养基2 37℃分批发酵 | 第37-39页 |
| ·自诱导培养基2 30℃分批发酵 | 第39-40页 |
| ·合成培养基中重组菌的生长和代谢 | 第40页 |
| ·以葡萄糖为碳源流加实验 | 第40-43页 |
| ·以甘油为碳源流加实验 | 第43-45页 |
| ·质粒稳定性实验 | 第45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 第5章 分离方法初步探索 | 第47-52页 |
| ·超滤条件选择 | 第47-48页 |
| ·静态吸附研究 | 第48-50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第6章 结论与展望 | 第52-53页 |
| ·结论 | 第52页 |
| ·展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
