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白菜花粉发育与授粉受精相关基因BcJMJ30和BcMF22的表达分析与功能验证

致谢第1-9页
目录第9-13页
缩略词(Abbreviation)第13-15页
氨基酸简写符号第15-16页
摘要第16-18页
Abstract第18-20页
前言第20-22页
1 文献综述第22-34页
   ·植物花粉发育第22-24页
     ·花粉发育过程第22-23页
     ·花粉壁第23页
     ·绒毡层发育第23-24页
   ·植物的授粉受精第24-25页
     ·花粉黏附第24页
     ·花粉水合第24页
     ·花粉萌发和花粉管生长第24-25页
   ·成熟花粉粒中mRNA的储运第25-26页
   ·表观遗传第26-34页
     ·组蛋白甲基化第26-28页
       ·组蛋白密码第26页
       ·组蛋白甲基化第26-28页
     ·组蛋白甲基化是一种可逆的修饰第28页
     ·组蛋白去甲基化第28-32页
       ·组蛋白去甲基化酶LSD1第28-29页
       ·含有JmjC域的组蛋白去甲基化酶第29-32页
     ·含有JmjC域的组蛋白去甲基化酶在植物花发育中的作用第32-34页
2 白菜花粉发育与授粉受精相关基因BcJMJ30的序列与表达分析第34-50页
   ·材料与方法第34-39页
     ·植物基因组DNA、总RNA的提取及cDNA的合成第34-36页
       ·植物材料第34页
       ·植物基因组DNA的提取第34-35页
       ·植物总RNA的提取及检测第35-36页
       ·cDNA的合成第36页
     ·目的基因cDNA编码区的获得第36页
     ·目的基因cDNA非编码区的获得第36-37页
       ·3’RACE扩增第36-37页
       ·5’末端TAIL-PCR第37页
     ·目的基因DNA序列全长的获得第37页
     ·序列特征分析第37-38页
     ·分子进化树的构建第38-39页
     ·基因时空表达模式分析第39页
       ·RT-PCR分析第39页
       ·qRT-PCR分析第39页
       ·组织原位杂交分析第39页
   ·结果与分析第39-45页
     ·目的基因cDNA全长的获得第39-41页
     ·目的基因DNA全长的获得第41页
     ·目的基因核苷酸及氨基酸序列分析第41-44页
     ·进化分析表明目的基因与拟南芥JMJ30亲缘关系密切第44页
     ·BcJMJ30在白菜‘Bajh97-01AB’中的时空表达模式第44-45页
       ·BcJMJ30在白菜花粉发育与授粉受精中持续表达第44页
       ·BcJMJ30在花粉与绒毡层中特异表达第44-45页
   ·讨论第45-50页
     ·白菜BcJMJ30组蛋白去甲基化酶的特性第45-47页
     ·白菜BcJMJ30参与花粉发育和授粉受精第47-50页
3 白菜组蛋白去甲基化酶基因BcJMJ30的功能分析第50-66页
   ·材料与方法第50-55页
     ·反义RNA载体的构建第50-51页
       ·反义片段的获得第50页
       ·双元载体pCAMBIA1301的制备第50-51页
       ·表达质粒的构建第51页
       ·冻融法转化农杆菌第51页
       ·农杆菌中质粒鉴定第51页
     ·反义表达载体对菜心的遗传转化第51-54页
       ·植物材料、菌株及抗生素第52页
       ·菜心的遗传转化体系第52-53页
       ·反义表达载体对菜心的遗传转化步骤第53-54页
     ·转基因植株的分子检测第54页
       ·转基因植株基因组DNA和总RNA的提取第54页
       ·转基因植株的PCR检测第54页
       ·转基因植株的RT-PCR鉴定第54页
     ·转基因植株开放花形态观察第54-55页
     ·转基因植株花粉发育的扫描电镜观察第55页
     ·转基因植株花粉生活力观察第55页
     ·转基因植株的花粉萌发试验第55页
   ·结果与分析第55-63页
     ·BcJMJ30反义RNA载体的构建第55-56页
       ·BcJMJ30反义片段的获得第55-56页
       ·BcJMJ30反义表达载体在农杆菌中的鉴定第56页
     ·获得转反义BcJMJ30菜心植株第56-57页
     ·转反义BcJMJ30菜心植株的分子检测第57-58页
       ·转反义BcJMJ30菜心植株的PCR检测第57页
       ·转反义BcJMJ30菜心植株的RT-PCR鉴定第57-58页
     ·转反义BcJMJ30菜心植株形态特征观察第58页
     ·转反义BcJMJ30菜心植株花粉的细胞学观察第58-59页
     ·转反义BcJMJ30菜心植株的花粉生活力观察第59-60页
     ·转反义BcJMJ30菜心植株的花粉萌发试验第60-62页
       ·转反义BcJMJ30菜心植株的花粉体外萌发观察第60-61页
       ·转反义BcJMJ30菜心植株的花粉柱头萌发观察第61-62页
     ·转反义BcJMJ30菜心植株的结荚情况观察第62-63页
   ·讨论第63-66页
4 白菜花粉发育与授粉受精相关基因BcMF22的序列与表达分析第66-76页
   ·材料与方法第66-68页
     ·植物材料第66页
     ·目的基因cDNA编码区的获得第66-67页
     ·目的基因cDNA非编码区的获得第67页
       ·3’RACE扩增第67页
       ·5’端同源扩增第67页
     ·目的基因DNA序列全长的获得第67-68页
     ·序列特征分析第68页
     ·目的基因时空表达模式分析第68页
       ·qRT-PCR分析第68页
       ·组织原位杂交分析第68页
   ·结果与分析第68-72页
     ·获得目的基因的cDNA与DNA全长第68-69页
     ·目的基因核苷酸与氨基酸序列分析第69-70页
     ·BcMF22在白菜‘Bajh97-01A B’中的时空表达模式第70-72页
       ·BcMF22在白菜花粉发育与授粉受精中持续表达第70-72页
       ·BcMF22在花粉与授粉后雌蕊中的表达第72页
   ·讨论第72-76页
5 白菜花粉发育与授粉受精相关基因BcMF22的功能分析第76-86页
   ·材料与方法第76-78页
     ·反义RNA载体的构建第76-77页
       ·反义片段的获得第76-77页
       ·双元载体pCAMBIA1301的制备第77页
       ·表达质粒的构建第77页
       ·冻融法转化农杆菌第77页
       ·农杆菌中质粒鉴定第77页
     ·转基因植株的获得第77页
     ·转基因植株的分子检测第77-78页
       ·转基因植株基因组DNA和总RNA的提取第78页
       ·转基因植株的PCR检测第78页
       ·转基因植株的RT-PCR鉴定第78页
     ·转基因植株花粉生活力观察第78页
     ·转基因植株的花粉萌发试验第78页
   ·结果与分析第78-84页
     ·BcMF22反义RNA载体的构建第78页
       ·BcMF22反义片段的获得第78页
       ·BcMF22反义表达载体在农杆茼中的鉴定第78页
     ·获得转反义BcMF22菜心植株第78-79页
     ·转反义BcMF22菜心植株的分子检测第79-81页
       ·转反义BcMF22菜心植株的PCR检测第79-80页
       ·转反义BcMF22菜心植株的RT-PCR鉴定第80-81页
     ·转反义BcMF22菜心植株花粉生活力观察第81-82页
     ·转反义BcMF22菜心植株的花粉萌发试验第82-83页
     ·转反义BcMF22菜心植株结荚情况观察第83-84页
   ·讨论第84-86页
结论第86-88页
参考文献第88-102页
博士期间发表的论文第102页

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