| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表(Abbreviations) | 第14-15页 |
| 1 前言 | 第15-26页 |
| ·牛结核病流行现状及国内外防控进展 | 第15-16页 |
| ·牛结核病病原 | 第16页 |
| ·流行病学 | 第16-18页 |
| ·临床症状 | 第18-19页 |
| ·牛结核病的抗体诊断技术研究进展 | 第19-24页 |
| ·牛结核病诊断抗原的研究 | 第19-21页 |
| ·牛结核病诊断方法研究现状 | 第21-24页 |
| ·研究目的 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-40页 |
| ·实验材料准备 | 第26-30页 |
| ·菌种、血清及抗原 | 第26页 |
| ·主要试剂及材料 | 第26-27页 |
| ·质粒抽提溶液的配制 | 第27-28页 |
| ·十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)相关溶液配制 | 第28-29页 |
| ·Western blot分析缓冲液的配制 | 第29页 |
| ·ELISA缓冲液配制 | 第29页 |
| ·蛋白表达纯化、多抗纯化相关试剂配制 | 第29-30页 |
| ·引物设计及引物合成 | 第30-31页 |
| ·牛分枝杆菌抗原Rv3872、CFP10和ESAT6融合基因的克隆、载体构建及重组质粒鉴定 | 第31-34页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl_2法)、质粒抽提及转化 | 第32页 |
| ·重组质粒的构建和鉴定 | 第32-34页 |
| ·目的基因的表达、鉴定和纯化 | 第34-36页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE鉴定目的蛋白 | 第35页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·目的蛋白表达、纯化条件优化 | 第36页 |
| ·融合蛋白性质分析 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白的ELISA活性分析 | 第36页 |
| ·Western-blot分析融合蛋白活性 | 第36-37页 |
| ·纯化蛋白的热稳定性分析 | 第37页 |
| ·融合蛋白间接ELISA方法建立 | 第37-38页 |
| ·间接ELISA方法最佳反应浓度的确定 | 第37页 |
| ·间接ELISA方法灵敏度和特异性评价 | 第37-38页 |
| ·应用间接ELISA方法检测临床样本 | 第38页 |
| ·胶体金免疫层析方法的建立 | 第38-40页 |
| ·RCE-胶体金复合物制备及纯化 | 第38页 |
| ·质控线兔抗RCE蛋白IgG的制备与提纯 | 第38-39页 |
| ·试纸条的组装及初步应用效果评价 | 第39-40页 |
| ·灵敏度与特异性评价 | 第40页 |
| ·临床样本检测 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-58页 |
| ·三基因融合蛋白RCE的载体构建和表达纯化 | 第40-44页 |
| ·三基因融合蛋白RCE的载体构建及鉴定 | 第40-42页 |
| ·三基因融合蛋白RCE的表达、纯化 | 第42-44页 |
| ·五基因融合蛋白R5的载体构建和表达纯化 | 第44-46页 |
| ·五基因融合蛋白载体pET-28a-Rv3872-70-83-CE的构建及鉴定 | 第44-46页 |
| ·五基因融合蛋白R5的表达与纯化 | 第46页 |
| ·两种新型融合蛋白的性质分析 | 第46-49页 |
| ·两种新型融合蛋白ELISA活性分析 | 第46-47页 |
| ·两种融合蛋白Western-blot分析 | 第47页 |
| ·两种融合蛋白的热稳定性分析 | 第47-49页 |
| ·三基因融合蛋白诊断方法的建立及临床应用 | 第49-56页 |
| ·三基因融合蛋白RCE间接ELISA方法的建立 | 第49页 |
| ·RCE蛋白ELISA敏感性和特异性评估 | 第49-50页 |
| ·RCE蛋白胶体金试纸条的制备 | 第50-54页 |
| ·RCE蛋白间接ELISA检测临床血清样本 | 第54-56页 |
| ·RCE蛋白在人结核病检测中的初步应用 | 第56-57页 |
| ·五基因融合蛋白R5间接ELISA方法建立 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-63页 |
| ·融合蛋白的克隆表达及特性探讨 | 第58-61页 |
| ·结核分支杆菌特性分析 | 第58-59页 |
| ·选择联合抗原的原则 | 第59-60页 |
| ·融合蛋白鉴别诊断及特性分析 | 第60页 |
| ·表达技术难度 | 第60-61页 |
| ·RCE抗体检测间接ELISA与胶体金试纸条 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 附录 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
