| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-23页 |
| ·牛结核病的流行与危害 | 第12-13页 |
| ·牛结核病的防控策略 | 第13-14页 |
| ·结核IFN-γ体外释放检测法在人与动物结核诊断中的应用 | 第14-23页 |
| ·结核现有的诊断方法 | 第15-18页 |
| ·IFN-γ体外释放法的应用现状 | 第18-20页 |
| ·IFN-γ体外释放法的研发方向 | 第20-23页 |
| 2 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-39页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌种、质粒及细胞 | 第24页 |
| ·试验动物 | 第24页 |
| ·血清 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第25-27页 |
| ·方法 | 第27-39页 |
| ·重组蛋白牛IFN-γ的表达 | 第27页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第27页 |
| ·重组可溶性蛋白的纯化与分析 | 第27-29页 |
| ·抗p30-BovIFN-γ单克隆抗体的制备 | 第29-31页 |
| ·抗p30-BovIFN-γ多克隆抗体的制备 | 第31-32页 |
| ·抗p30-BovIFN-γ单克隆抗体的鉴定 | 第32-33页 |
| ·抗体的纯化 | 第33-34页 |
| ·牛IFN-γ双抗体夹心间接ELISA检测方法的建立 | 第34-35页 |
| ·商品试剂盒Bovigam~(TM)牛结核分枝杆菌γ-干扰素检测试剂盒 | 第35-37页 |
| ·牛结核菌素皮内变态反应 | 第37-38页 |
| ·新型抗原在牛IFN-γ体外释放检测法中应用的评价 | 第38页 |
| ·基于不同浓度结核菌素刺激的牛结核IFN-γ体外释放的检测 | 第38-39页 |
| 4 结果与分析 | 第39-51页 |
| ·重组表达质粒p30-BovIFN-γ的表达与纯化 | 第39-40页 |
| ·重组表达质粒p30-BovIFN-γ的构建与测序 | 第39页 |
| ·重组可溶性蛋白的His-Tag亲和层析纯化与分析 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的活性分析(ELISA) | 第40页 |
| ·抗p30-BovIFN-γ多克隆抗体效价测定 | 第40-41页 |
| ·抗p30-BovIFN-γ单克隆抗体的制备 | 第41-44页 |
| ·间接ELISA方法的确定 | 第41页 |
| ·McAb制备过程中细胞融合后的观察 | 第41-42页 |
| ·融合后筛选及克隆化培养结果 | 第42页 |
| ·杂交瘤细胞染色体计数结果 | 第42-43页 |
| ·抗p30-BovIFN-γMcAb效价(腹水)、Ig亚型及相对亲和力的测定 | 第43页 |
| ·抗p30-BovIFN-γ的McAb和PcAb的纯化 | 第43-44页 |
| ·牛IFN-γ双抗体夹心间接ELISA方法的建立 | 第44-45页 |
| ·最适单抗包被量和夹心抗体稀释倍数的选择 | 第44-45页 |
| ·敏感性试验 | 第45页 |
| ·特异性试验 | 第45页 |
| ·皮内变态反应实验(TST)、商品试剂盒Bovigam~(TM)和自主研发的试剂盒的相互比对试验 | 第45-46页 |
| ·新型抗原CE、RCE在牛IFN-γ体外释放检测法中应用的评价 | 第46-49页 |
| ·ConA的有效刺激浓度的确定 | 第46-47页 |
| ·CE、RCE的有效浓度的确定 | 第47-48页 |
| ·CE、RCE在血清中的检测及应用 | 第48-49页 |
| ·基于不同浓度结核菌素刺激的牛结核IFN-γ体外释放的检测 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-56页 |
| ·关于免疫抗原 | 第51页 |
| ·关于单克隆抗体的制备 | 第51-52页 |
| ·关于抗体的纯化 | 第52-53页 |
| ·关于牛结核IFN-γ体外释放双抗夹心ELISA检测法的建立 | 第53-54页 |
| ·关于CE、RCE应用于IFN-γ体外释放检测法的评价 | 第54-56页 |
| 6 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附录 | 第65页 |
