| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-22页 |
| ·普鲁兰酶 | 第11-13页 |
| ·概述 | 第11页 |
| ·普鲁兰酶的定义与分类 | 第11-12页 |
| ·普鲁兰酶菌种的来源 | 第12-13页 |
| ·普鲁兰酶研究技术发展 | 第13-15页 |
| ·概述 | 第13-14页 |
| ·传统微生物改造技术 | 第14页 |
| ·基因工程改造技术 | 第14-15页 |
| ·基因酶的克隆表达 | 第15页 |
| ·普鲁兰酶的分子结构与催化机制 | 第15-18页 |
| ·普鲁兰酶的分子结构 | 第15-16页 |
| ·普鲁兰酶的催化机制 | 第16-18页 |
| ·普鲁兰酶的应用 | 第18-19页 |
| ·研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-30页 |
| ·实验材料 | 第22页 |
| ·样品采集 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·主要酶和试剂 | 第22页 |
| ·培养基及主要仪器设备 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-30页 |
| ·产普鲁兰酶菌株的筛选 | 第22-23页 |
| ·菌株的鉴定 | 第23页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第23页 |
| ·质粒的制备 | 第23-24页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第24页 |
| ·DNA的酶切与胶回收 | 第24页 |
| ·DNA的连接 | 第24页 |
| ·连接产物的转化 | 第24-25页 |
| ·TA克隆重组子的筛选 | 第25页 |
| ·普鲁兰酶基因的克隆与测序 | 第25页 |
| ·信号肽和疏水跨膜区预测 | 第25页 |
| ·普鲁兰酶基因的表达 | 第25-26页 |
| ·重组普鲁兰酶的纯化 | 第26-27页 |
| ·SDS-PAGE凝胶电泳 | 第27页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第27-28页 |
| ·重组普鲁兰酶酶学性质研究 | 第28页 |
| ·酶活力测定 | 第28页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第28-29页 |
| ·重组普鲁兰酶的分子改造 | 第29页 |
| ·HPLC对普鲁兰酶水解产物的分析 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与分析 | 第30-85页 |
| ·产普鲁兰酶菌株的筛选鉴定 | 第30-32页 |
| ·GXBC-3的分离筛选 | 第30页 |
| ·GXBC-3的形态学及生理生化特征 | 第30-31页 |
| ·GXBC-3的16S rDNA系统发育分析 | 第31-32页 |
| ·蛋白标准曲线和葡萄糖标准曲线的绘制 | 第32-33页 |
| ·蛋白标准曲线的绘制 | 第32页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第32-33页 |
| ·GXBC-3普鲁兰酶pulA基因的的克隆表达、纯化及酶学特性 | 第33-46页 |
| ·普鲁兰酶基因pulA的TA克隆与测序 | 第33-34页 |
| ·普鲁兰酶基因pulA序列分析 | 第34-36页 |
| ·pSE380-pulA重组表达质粒的构建、筛选 | 第36-38页 |
| ·普鲁兰酶PulA的表达纯化 | 第38页 |
| ·重组酶PulA的酶学特性 | 第38-46页 |
| ·GXBC-3普鲁兰酶pulB基因的的克隆表达、纯化及酶学特性 | 第46-56页 |
| ·普鲁兰酶基因pulB的TA克隆与测序 | 第46页 |
| ·普鲁兰酶基因pulB序列分析 | 第46-48页 |
| ·pSE380-pulB重组表达质粒的构建、筛选 | 第48-49页 |
| ·普鲁兰酶PulB的表达纯化 | 第49-51页 |
| ·重组酶PulB的酶学特性 | 第51-56页 |
| ·GXBC-3普鲁兰酶pulC基因的的克隆表达、纯化及酶学特性 | 第56-66页 |
| ·普鲁兰酶基因pulC的TA克隆与测序 | 第56-57页 |
| ·普鲁兰酶基因pulC序列分析 | 第57-59页 |
| ·pSE380-pulC重组表达质粒的构建、筛选 | 第59-60页 |
| ·普鲁兰酶PulC的表达纯化 | 第60-61页 |
| ·重组酶PulC的酶学特性 | 第61-66页 |
| ·反向PCR介导普鲁兰酶PulA的分子改造 | 第66-67页 |
| ·pSE380-QSpulA重组表达质粒的构建与筛选 | 第66-67页 |
| ·缺失酶QSPulA的表达纯化 | 第67页 |
| ·反向PCR介导普鲁兰酶PulB的分子改造 | 第67-69页 |
| ·pSE380-QSpulB重组表达质粒的构建与筛选 | 第67-69页 |
| ·缺失酶QSPulB的表达纯化 | 第69页 |
| ·反向PCR介导普鲁兰酶PulC的分子改造 | 第69-85页 |
| ·pSE380-QSpulC重组表达质粒的构建与筛选 | 第69-70页 |
| ·缺失酶QSPulC的表达纯化 | 第70-71页 |
| ·缺失酶QSPulC的酶学特性 | 第71-85页 |
| 第四章 讨论 | 第85-89页 |
| ·产普鲁兰酶菌株Bacillus cereus GXBC-3的筛选鉴定 | 第85页 |
| ·Bacillus cereus GXBC-3普鲁兰酶的表达和酶学特性 | 第85-86页 |
| ·普鲁兰酶的分子改造 | 第86-89页 |
| 第五章 结论与展望 | 第89-92页 |
| ·结论 | 第89-90页 |
| ·问题与展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-99页 |
| 附录 | 第99-105页 |
| 附录1 | 第99-100页 |
| 附录2 | 第100-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第106页 |
