| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 英文缩略词表 | 第8-12页 |
| 前言 | 第12-25页 |
| ·蛋白质工程简介 | 第12-15页 |
| ·蛋白质工程的起源与目标 | 第12页 |
| ·蛋白质工程的研究进展和应用前景 | 第12-14页 |
| ·蛋白质工程原理和基本操作 | 第14-15页 |
| ·同源建模、虚拟突变与分子动力学模拟 | 第15-20页 |
| ·蛋白质结构模拟 | 第15页 |
| ·同源建模 | 第15-17页 |
| ·虚拟突变 | 第17页 |
| ·分子动力学模拟 | 第17-20页 |
| ·基于生物催化与计算化学的蛋白分子蛋白酶抗性的理性设计 | 第20页 |
| ·胰蛋白酶及其催化机制 | 第20-21页 |
| ·木聚糖酶的简介和蛋白质工程 | 第21-24页 |
| ·木聚糖及木聚糖酶的简介 | 第21-23页 |
| ·木聚糖酶的蛋白质工程 | 第23-24页 |
| ·研究背景、意义和实验流程 | 第24-25页 |
| 第二章 实验设备、试剂及材料 | 第25-29页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·实验材料 | 第26-29页 |
| ·菌种及载体 | 第26页 |
| ·培养基和常用试剂 | 第26-28页 |
| ·酶类 | 第28页 |
| ·试剂盒 | 第28页 |
| ·其它 | 第28-29页 |
| 第三章 实验方法 | 第29-42页 |
| ·胰蛋白酶抗性的理性设计 | 第29-30页 |
| ·B.subtilis 168 β-1,4-内切木聚糖酶 XynA 三维模型的构建 | 第29页 |
| ·胰蛋白酶水解位点的查找 | 第29页 |
| ·候选突变氨基酸残基的确定 | 第29页 |
| ·更替氨基酸的选择和突变氨基酸组合类型的确定 | 第29-30页 |
| ·野生型木聚糖酶 XynA 重组菌的构建及重组子的鉴定 | 第30-32页 |
| ·Bacillus subtilis 168 基因组的提取[63] | 第30页 |
| ·XynA 全长基因的扩增 | 第30-31页 |
| ·@@@a-XynA 重组质粒的构建及转化 | 第31-32页 |
| ·BL21(DE3)-@@@a-XynA 诱导表达和酶学性质分析 | 第32-35页 |
| ·XynA 诱导表达条件的探索 | 第32页 |
| ·SDS-PAGE 检测表达产物 | 第32-33页 |
| ·XynA 的诱导表达 | 第33页 |
| ·XynA 的纯化、分析和鉴定 | 第33-34页 |
| ·XynA 酶学性质分析 | 第34-35页 |
| ·单点突变体 XynA**重组菌的构建和重组子的鉴定 | 第35-36页 |
| ·单点突变（**）引物设计 | 第35页 |
| ·重叠延伸 PCR (over-lap PCR) 法定点突变 | 第35页 |
| ·XynA**全长基因的获得 | 第35页 |
| ·PCR 产物纯化回收 | 第35页 |
| ·@@@a-XynA**重组质粒的构建及转化 | 第35-36页 |
| ·BL21(DE3)-@@@a-XynA**的诱导表达和酶学性质的分析 | 第36-37页 |
| ·单点突变体重组质粒转化 BL21(DE3)诱导表达 | 第36页 |
| ·XynA**的纯化、分析与鉴定 | 第36-37页 |
| ·XynA**酶学性质分析 | 第37页 |
| ·两点组合突变体 XynA**/**重组菌的构建和重组子的鉴定 | 第37-39页 |
| ·两点组合突变（**/**）引物的设计 | 第37页 |
| ·重叠延伸 PCR (over-lap PCR) 法定点突变 | 第37页 |
| ·XynA**/**全长基因的获得 | 第37-38页 |
| ·PCR 产物纯化回收 | 第38页 |
| ·@@@a-XynA**/**重组质粒的构建及转化 | 第38-39页 |
| ·BL21(DE3)-@@@a-XynA**/**的诱导表达和酶学性质的分析 | 第39页 |
| ·两点突变体重组质粒转化 BL21(DE3)诱导表达 | 第39页 |
| ·XynA**/**的纯化、分析与鉴定 | 第39页 |
| ·XynA**/**酶学性质分析 | 第39页 |
| ·突变体 XynA**重组菌的构建和重组子的鉴定 | 第39-41页 |
| ·突变（**）引物的设计 | 第39-40页 |
| ·重叠延伸 PCR (over-lap PCR) 法定点突变 | 第40页 |
| ·XynA**全长基因的获得 | 第40页 |
| ·PCR 产物纯化回收 | 第40页 |
| ·@@@a-XynA**重组质粒的构建和转化 | 第40-41页 |
| ·BL21(DE3)-@@@a-XynA**的诱导表达和酶学性质的分析 | 第41-42页 |
| ·突变体 XynA**重组质粒转化 BL21(DE3)诱导表达 | 第41页 |
| ·XynA**的纯化、分析与鉴定 | 第41页 |
| ·突变体 XynA**酶学性质分析 | 第41-42页 |
| 第四章 实验结果 | 第42-50页 |
| ·胰蛋白酶抗性的理性设计 | 第42-43页 |
| ·B.subtilis 168 β-1,4-内切木聚糖酶 XynA 三维模型的构建 | 第42页 |
| ·木聚糖酶 XynA 候选突变位点的选择和突变类型的确定 | 第42页 |
| ·模拟突变和选择突变体 | 第42-43页 |
| ·分子动力学模拟评价突变体的稳定性 | 第43页 |
| ·野生型与突变型的结构比对 | 第43页 |
| ·野生型 XynA 重组菌的构建及蛋白诱导表达纯化 | 第43-45页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第43页 |
| ·PCR 获得野生型全长基因 | 第43-44页 |
| ·重组子 pMD18-T-XynA 鉴定及序列测定 | 第44页 |
| ·重组子@@@a-XynA 的鉴定及测序 | 第44-45页 |
| ·XynA 诱导表达条件的探索 | 第45页 |
| ·XynA 的纯化 | 第45页 |
| ·单点突变体 XynA**重组菌的构建和蛋白诱导表达纯化 | 第45-46页 |
| ·重叠延伸 PCR 获得单点突变体突变基因 | 第45页 |
| ·重组子@@@a-XynA**的鉴定及测序 | 第45-46页 |
| ·改良酶 XynA**的纯化 | 第46页 |
| ·组合突变体 XynA**/**重组菌的构建和蛋白诱导表达纯化 | 第46-47页 |
| ·重叠延伸 PCR 获得两点组合突变体突变基因 | 第46页 |
| ·重组子@@@a-XynA**/**的鉴定及测序 | 第46页 |
| ·改良酶 XynA**/**的纯化 | 第46-47页 |
| ·突变体 XynA**重组菌的构建和蛋白诱导表达纯化 | 第47页 |
| ·重叠延伸 PCR 获得单点突变体突变基因 | 第47页 |
| ·重组子@@@a-XynA**的鉴定及测序 | 第47页 |
| ·改良酶 XynA**的纯化 | 第47页 |
| ·野生型及突变体酶学性质分析 | 第47-50页 |
| ·最适 pH | 第47-48页 |
| ·最适温度 | 第48页 |
| ·pH 稳定性 | 第48页 |
| ·温度稳定性 | 第48页 |
| ·野生型及突变体在胰蛋白酶溶液中的稳定性 | 第48-49页 |
| ·储藏稳定性 | 第49-50页 |
| 第五章 讨论 | 第50-54页 |
| ·理性设计中突变位点的选择和突变体组合类型的确定 | 第50页 |
| ·突变位点的选择 | 第50页 |
| ·突变体组合类型的确定 | 第50页 |
| ·突变类型与突变体的性质 | 第50-52页 |
| ·单点突变 | 第50-51页 |
| ·两点联合突变 | 第51页 |
| ·内部对照突变 | 第51-52页 |
| ·重叠延伸 PCR 定点突变 | 第52页 |
| ·酶的诱导表达与纯化 | 第52-54页 |
| 总结与展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文及获奖情况 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 特别致谢 | 第63页 |
