| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-5页 |
| 中文文摘 | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-29页 |
| ·课题背景 | 第11-12页 |
| ·酶热稳定性概述 | 第12-29页 |
| ·简介 | 第12-13页 |
| ·酶热稳定性的定义 | 第13页 |
| ·热稳定性酶的特性 | 第13-14页 |
| ·热稳定性酶的优点及应用 | 第14-15页 |
| ·酶的热失活机制 | 第15-16页 |
| ·影响酶热稳定性的因素 | 第16-22页 |
| ·提高酶热稳定性策略 | 第22-29页 |
| 第2章 材料与方法 | 第29-45页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·菌种和载体 | 第29页 |
| ·工具酶 | 第29页 |
| ·其它试剂 | 第29页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第29-30页 |
| ·寡聚核苷酸引物 | 第30-32页 |
| ·常用仪器 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-45页 |
| ·pSK-ep8模板的构建 | 第32-35页 |
| ·ep8基因组的制备 | 第32页 |
| ·目的基因的获得 | 第32-33页 |
| ·克隆载体pSK-ep8的构建 | 第33-34页 |
| ·载体pSK-ep8的转化与筛选 | 第34页 |
| ·重组质粒DNA的制备 | 第34-35页 |
| ·pSK-ep8重组质粒(模板)的测序 | 第35页 |
| ·叠加及单点突变 | 第35-45页 |
| ·PEL-ep8-K115R叠加突变(重叠延伸PCR) | 第35-38页 |
| ·PEL-K115R单点突变 | 第38-39页 |
| ·PEL-ep8-K55R叠加突变 | 第39-40页 |
| ·PEL-ep8-E214P叠加突变 | 第40页 |
| ·PEL-E214P单点突变 | 第40-41页 |
| ·PEL-ep8-S104V叠加突变 | 第41页 |
| ·PEL-ep8-S139V叠加突变 | 第41页 |
| ·PEL-ep8-N166E叠加突变 | 第41-42页 |
| ·PEL-ep8-G205P叠加突变 | 第42页 |
| ·PEL-ep8-A170P叠加突变 | 第42页 |
| ·PEL-ep8-A144P叠加突变 | 第42-43页 |
| ·PEL-ep8-A105P叠加突变 | 第43-45页 |
| 第3章 结果与分析 | 第45-73页 |
| ·pSK-ep8模板的构建 | 第45页 |
| ·叠加及单点突变 | 第45-73页 |
| ·突变点的选择 | 第45-46页 |
| ·PEL-ep8-K115R叠加突变 | 第46-51页 |
| ·突变基因的获得 | 第46-47页 |
| ·重组表达质粒pAO815-ep8-K115R的构建及筛选 | 第47-48页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第48-49页 |
| ·PEL-ep8-K115R-GS最适作用温度和热稳定性的研究 | 第49-51页 |
| ·PEL-K115R单点突变 | 第51-54页 |
| ·突变基因的获得 | 第51页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第51-52页 |
| ·PEL-K115R-GS的最适作用温度和热稳定性 | 第52-54页 |
| ·PEL-ep8-K55R叠加突变 | 第54-57页 |
| ·突变基因的获得 | 第54页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第54-55页 |
| ·PEL-ep8-K55R-GS最适作用温度和热稳定性研究 | 第55-57页 |
| ·PEL-ep8-E214P叠加突变及PEL-E214P单点突变 | 第57-60页 |
| ·突变基因的获得 | 第57页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第57-58页 |
| ·PEL-ep8-E214P-GS及PEL-ep8-GS的最适作用温度和热稳定性 | 第58-60页 |
| ·PEL-ep8-S104V叠加突变 | 第60-63页 |
| ·突变基因的获得 | 第60页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第60-61页 |
| ·PEL-ep8-S104V-GS最适作用温度与热稳定性研究 | 第61-63页 |
| ·PEL-ep8-S139V-GS叠加突变 | 第63-65页 |
| ·突变基因的获得 | 第63页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第63-64页 |
| ·PEL-ep8-S139V-GS最适作用温度和热稳定性研究 | 第64-65页 |
| ·PEL-ep8-N166E-GS叠加突变 | 第65-68页 |
| ·突变基因的获得 | 第65-66页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第66页 |
| ·PEL-ep8-N166E-GS的最适作用温度和热稳定性 | 第66-68页 |
| ·PEL-ep8-G205P-GS叠加突变 | 第68页 |
| ·突变基因的获得 | 第68页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第68页 |
| ·PEL-ep8-A170P-GS叠加突变 | 第68-69页 |
| ·突变基因的获得 | 第68-69页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第69页 |
| ·PEL-ep8-A144P-GS叠加突变 | 第69-70页 |
| ·突变基因的获得 | 第69-70页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第70页 |
| ·PEL-ep8-A105P-GS叠加突变 | 第70-73页 |
| ·突变基因的获得 | 第70-71页 |
| ·突变基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第71-73页 |
| 第4章 讨论 | 第73-77页 |
| 结论 | 第77-79页 |
| 附录 英文缩略词表 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-89页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 个人简历 | 第93-95页 |
