| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-22页 |
| ·邻苯二酚的理化性质 | 第12-13页 |
| ·邻苯二酚的生产现状及市场 | 第13-14页 |
| ·邻苯二酚的生产方法 | 第14-19页 |
| ·化学工艺法生产邻苯二酚 | 第14-16页 |
| ·生物发酵法合成邻苯二酚 | 第16-19页 |
| ·邻苯二酚纯化 | 第19-21页 |
| ·本研究的实验技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-37页 |
| ·材料: | 第22页 |
| ·土壤样品来源 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·菌种保存: | 第23页 |
| ·生长条件 | 第23页 |
| ·溶液、缓冲液和试剂 | 第23-24页 |
| ·常用抗生素及其使用浓度 | 第24-25页 |
| ·仪器 | 第25-26页 |
| ·DNA的提取 | 第26-29页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第26-29页 |
| ·邻苯二酚产生菌总DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·常规提取 | 第29页 |
| ·快速提取 | 第29-30页 |
| ·邻苯二酚产生菌总DNA的大量提取 | 第30页 |
| ·质粒DNA的纯化、定量与沉淀 | 第30-31页 |
| ·酚/氯仿抽提 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA的沉淀与贮存: | 第31页 |
| ·DNA酶切 | 第31-32页 |
| ·DNA的限制性内切酶酶切 | 第31页 |
| ·酶切DNA片段的CIP处理 | 第31-32页 |
| ·DNA酶切片段的分离与回收 | 第32-33页 |
| ·从低熔点胶中回收DNA片段: | 第32-33页 |
| ·试剂盒法回收DNA片段 | 第33页 |
| ·分光光度法测定DNA浓度 | 第33-34页 |
| ·电泳 | 第34页 |
| ·DNA的连接 | 第34-35页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第35-36页 |
| ·快速制备E.coli的感受态细胞——CaCl_2法 | 第35页 |
| ·转化反应 | 第35-36页 |
| ·质粒DNA的电脉冲导入 | 第36页 |
| ·PCR扩增DNA片段 | 第36-37页 |
| 第三章 邻苯二酚产生菌株的筛选及鉴定 | 第37-46页 |
| ·土壤样品的采集 | 第38页 |
| ·邻苯二酚的定量测定: | 第38-39页 |
| ·4-AAP溶液的配制: | 第38页 |
| ·CAT标准溶液: | 第38页 |
| ·邻苯二酚的测定方法: | 第38页 |
| ·邻苯二酚标准曲线的绘制: | 第38-39页 |
| ·菌液中邻苯二酚的检测: | 第39页 |
| ·邻苯二酚产生菌株的筛选: | 第39-40页 |
| ·初筛: | 第39页 |
| ·复筛: | 第39-40页 |
| ·菌株的抗生素测试实验,如表3-2所示 | 第40页 |
| ·菌种鉴定 | 第40-45页 |
| ·形态学鉴定: | 第41页 |
| ·16S rDNA鉴定: | 第41-45页 |
| ·结果与讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 邻苯二酚产生菌株的发酵条件初步优化 | 第46-51页 |
| ·不同氮源对产邻苯二酚发酵的影响 | 第47页 |
| ·不同碳源对X16菌株产邻苯二酚的影响 | 第47页 |
| ·苯甲酸钠浓度对X16产邻苯二酚的影响 | 第47-48页 |
| ·聚蛋白胨浓度对产邻苯二酚的影响 | 第48页 |
| ·最适发酵温度 | 第48-49页 |
| ·最适pH | 第49页 |
| ·在最佳发酵条件下邻苯二酚的产量 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-51页 |
| 第五章 产邻苯二酚菌株的固定化初步研究 | 第51-60页 |
| ·不同的固定化材料固定菌体发酵 | 第51页 |
| ·以海藻酸钠为固定化材料固定细胞的研究 | 第51-54页 |
| ·以海藻酸钠为固定化材料固定细胞的制作方法 | 第51-52页 |
| ·海藻酸钠浓度的选择 | 第52页 |
| ·不同CaCl_2浓度对固定化产邻苯二酚的影响 | 第52-53页 |
| ·固定化小球中菌体的含量对产邻苯二酚的影响 | 第53页 |
| ·交联时间对固定化小球产邻苯二酚的影响 | 第53-54页 |
| ·发酵液pH对固定化小球产邻苯二酚的影响 | 第54页 |
| ·以聚乙烯醇为固定化材料固定细胞 | 第54-56页 |
| ·不同聚乙烯醇的浓度对固定化产邻苯二酚的影响 | 第54-55页 |
| ·聚乙烯醇中菌体的含量对产邻苯二酚的影响 | 第55页 |
| ·冰冻时间对固定化产邻苯二酚的影响 | 第55页 |
| ·pH对固定化产邻苯二酚的影响 | 第55-56页 |
| ·以明胶作为固定化材料固定细胞 | 第56-57页 |
| ·明胶浓度对固定化产邻苯二酚的影响 | 第56页 |
| ·戊二醛浓度对固定化产邻苯二酚的影响 | 第56-57页 |
| ·以海藻酸钠和聚乙烯醇混合材料固定细胞 | 第57-59页 |
| ·不同海藻酸钠与聚乙烯醇混合加入的比例对固定化产邻苯二酚的影响 | 第57-58页 |
| ·交联时间对固定化产邻苯二酚的影响 | 第58页 |
| ·pH对固定化产邻苯二酚的影响 | 第58-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第六章 邻苯二酚双加氧酶酶学特性分析 | 第60-64页 |
| ·酶活定义: | 第60页 |
| ·酶作用的最适pH值 | 第60-61页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第61-62页 |
| ·酶的最适温度 | 第62-63页 |
| ·小结: | 第63-64页 |
| 第七章 总结与展望 | 第64-66页 |
| ·本研究的的工作总结包括: | 第64页 |
| ·本研究的后续工作包括: | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |