| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 前言 | 第13-27页 |
| ·海藻糖的分子结构及理化性质 | 第13-15页 |
| ·海藻糖对生物体的保护功能及其保护机理 | 第15-17页 |
| ·海藻糖在活体内和离体条件下均对生物体具有保护作用 | 第15-16页 |
| ·海藻糖对生物大分子的保护机理 | 第16-17页 |
| ·“水替代”假说——Water replacement Hypothesis | 第16页 |
| ·“玻璃态”假说——Glassy State Hypothesis | 第16-17页 |
| ·“优先排阻”假说 | 第17页 |
| ·海藻糖的其它生理功能 | 第17-18页 |
| ·作为细胞结构成分 | 第17页 |
| ·为生命活动提供能量 | 第17-18页 |
| ·海藻糖的应用 | 第18-21页 |
| ·食品工业 | 第18页 |
| ·抗食物过敏 | 第18页 |
| ·医药工业 | 第18-19页 |
| ·预防亨廷顿病 | 第19页 |
| ·抑制中老年人体臭 | 第19页 |
| ·化妆品工业 | 第19页 |
| ·分子生物学研究 | 第19-20页 |
| ·植物基因工程 | 第20-21页 |
| ·提高植物的抗逆性 | 第20页 |
| ·海藻糖生产的载体 | 第20页 |
| ·海藻糖合成基因作为转基因植物的筛选标记 | 第20-21页 |
| ·海藻糖酶抑制剂作为杀虫制剂 | 第21页 |
| ·海藻糖的其他应用 | 第21页 |
| ·诱导纤维素酶的合成 | 第21页 |
| ·海藻糖与镁的相互作用 | 第21页 |
| ·海藻糖合成途径及其相关基因 | 第21-24页 |
| ·在酵母中的代谢途径 | 第21-22页 |
| ·通过海藻糖合成酶以葡萄糖为底物合成海藻糖 | 第22-23页 |
| ·通过海藻糖合成酶以麦芽糖为底物合成海藻糖 | 第23页 |
| ·通过糖基转移酶和淀粉酶合成海藻糖 | 第23页 |
| ·通过麦芽寡糖基海藻糖合成酶和麦芽寡糖基海藻糖水解酶生成海藻糖 | 第23-24页 |
| ·衣藻的研究进展 | 第24-27页 |
| ·莱菌衣藻的生理特征 | 第24-25页 |
| ·莱茵衣藻的培养 | 第25页 |
| ·莱茵衣藻的遗传背景 | 第25页 |
| ·作为模式物种 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-42页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·质粒、菌株与藻株 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-42页 |
| ·衣藻的培养、纯化、保种及扩大培养 | 第28-29页 |
| ·培养 | 第28页 |
| ·纯化 | 第28-29页 |
| ·保种 | 第29页 |
| ·扩大培养 | 第29页 |
| ·衣藻中treh 基因的克隆 | 第29-31页 |
| ·衣藻总 RNA 的提取 | 第29页 |
| ·衣藻总 RNA 反转录成cDNA | 第29-30页 |
| ·以衣藻cDNA 为模板扩增treh 基因 | 第30页 |
| ·构建质粒载体的连接反应体系 | 第30-31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第31页 |
| ·克隆载体的鉴定 | 第31页 |
| ·质粒 DNA 提取、酶切鉴定和基因测序 | 第31-33页 |
| ·碱裂解法少量制备质粒 DNA | 第31-32页 |
| ·DNA 酶解反应体系 | 第32页 |
| ·DNA 酶切片段的纯化和回收 | 第32-33页 |
| ·DNA 序列的测定 | 第33页 |
| ·DNA 序列的生物信息学分析 | 第33页 |
| ·将克隆所得的衣藻treh 基因序列在衣藻网上进行序列性质对比 | 第33页 |
| ·蛋白质一级结构预测 | 第33页 |
| ·蛋白质二级结构预测 | 第33页 |
| ·目的基因在 E.coli 中的诱导表达及功能鉴定 | 第33-37页 |
| ·IPTG 诱导目的基因的表达 | 第33页 |
| ·E.coli 可溶性蛋白与不可溶蛋白的提取、分离 | 第33-34页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS-PAGE 胶的制备 | 第34页 |
| ·包涵体的溶解 | 第34页 |
| ·变性蛋白的透析 | 第34-35页 |
| ·过镍柱浓缩纯化复性的目的蛋白 | 第35-37页 |
| ·诱导表达的蛋白酶活性的测定 | 第37-39页 |
| ·酶活的测定原理 | 第37页 |
| ·葡萄糖氧化法试剂的配制 | 第37-38页 |
| ·葡萄糖溶液标准曲线的测定 | 第38页 |
| ·海藻糖水解酶反应时间与酶活的关系 | 第38-39页 |
| ·酶活测定方法 | 第39页 |
| ·酶活单位的定义 | 第39页 |
| ·衣藻总蛋白提取和海藻糖水解酶活性的测定 | 第39-42页 |
| ·衣藻生长曲线的测定 | 第39页 |
| ·海藻糖水解酶提取缓冲液的配制 | 第39-40页 |
| ·衣藻粗蛋白的提取 | 第40页 |
| ·衣藻粗蛋白的脱盐处理 | 第40-41页 |
| ·脱盐后的粗蛋白的酶活测定 | 第41页 |
| ·可溶性蛋白的标准曲线 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-56页 |
| ·衣藻的同步化培养 | 第42-43页 |
| ·同步化培养条件 | 第42页 |
| ·衣藻生长曲线的测定 | 第42-43页 |
| ·衣藻粗蛋白中的海藻糖水解酶活性 | 第43页 |
| ·衣藻treh 基因的克隆 | 第43-46页 |
| ·衣藻总 RNA 的提取及cDNA 的反转录 | 第43-44页 |
| ·从衣藻cDNA 中克隆treh 基因 | 第44页 |
| ·衣藻treh 基因的测序 | 第44-46页 |
| ·生物信息学分析 | 第46-52页 |
| ·衣藻treh 基因的 DNA 同源性分析 | 第46-47页 |
| ·衣藻treh 翻译蛋白的性质分析 | 第47-52页 |
| ·翻译蛋白质的一级结构预测及同源性分析 | 第47-48页 |
| ·翻译蛋白的氨基酸含量分析 | 第48-49页 |
| ·翻译蛋白质的二级结构预测 | 第49-52页 |
| ·衣藻treh 在大肠杆菌中的表达纯化与酶活分析 | 第52-56页 |
| ·大肠杆菌中表达载体的构建 | 第52页 |
| ·大肠杆菌中目的基因的诱导表达 | 第52-53页 |
| ·包涵体的变性与复性 | 第53-54页 |
| ·复性蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·Mg~(2+)及 EDTA 对酶活的影响 | 第55-56页 |
| 4 讨论与展望 | 第56-61页 |
| ·研究莱茵衣藻中海藻糖代谢的意义 | 第56-58页 |
| ·有助于了解高等植物的海藻糖代谢机理和作用 | 第56-57页 |
| ·莱茵衣藻中海藻糖代谢研究的展望 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌表达外源基因 | 第58-59页 |
| ·大肠杆菌作为宿主的优势 | 第58-59页 |
| ·大肠杆菌表达产物的活性 | 第59页 |
| ·生物信息学对未知蛋白的预测 | 第59-60页 |
| ·各种化学试剂对纯化蛋白活性测定的影响 | 第60-61页 |
| 5 总结 | 第61-63页 |
| ·克隆了莱茵衣藻的海藻糖水解酶基因treh | 第61页 |
| ·大肠杆菌中诱导表达目的蛋白与蛋白功能测定 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
