中文摘要 | 第1-10页 |
Abstract | 第10-12页 |
第一部分 文献综述 | 第12-38页 |
第一章 盐芥 ThTRXh 功能分析文献综述 | 第12-22页 |
1 硫氧还蛋白及硫氧还蛋白系统的组成及结构 | 第12-14页 |
2 硫氧还蛋白的功能 | 第14-20页 |
·硫氧还蛋白对细胞的氧化还原调控作用 | 第15页 |
·硫氧还蛋白对蛋白质/酶类的氧化还原调节作用 | 第15-17页 |
·硫氧还蛋白的抗氧化作用 | 第17页 |
·硫氧还蛋白对细胞凋亡的抑制和对生长的促进作用 | 第17-18页 |
·硫氧还蛋白对反式作用元件的调节作用 | 第18页 |
·细胞信号传导因子氧化还原调节和TRX对细胞信号传导的调节作用 | 第18-20页 |
·硫氧还蛋白的其它调节作用 | 第20页 |
3 硫氧还蛋白系统的研究结论和展望 | 第20-21页 |
4 基因沉默在植物基因功能研究中的应用 | 第21-22页 |
第二章 盐芥不同生态型的比较蛋白质组学初步研究 | 第22-38页 |
1 蛋白质组学研究的必要性 | 第22页 |
2 蛋白质组学研究进展 | 第22-33页 |
·广义蛋白质组学 | 第23-24页 |
·狭义蛋白质组学 | 第24-29页 |
·不基于凝胶分离的蛋白质组学分析方法 | 第24-27页 |
·染色 | 第27页 |
·图像采集 | 第27-28页 |
·质谱分析 | 第28-29页 |
·蛋白质组学在植物科学研究中的应用 | 第29-33页 |
·植物群体遗传蛋白质组学 | 第29-30页 |
·植物环境信号应答和适应机制蛋白质组学 | 第30-32页 |
·植物组织器官蛋白质组学 | 第32页 |
·植物亚细胞蛋白质组学 | 第32页 |
·鉴定蛋白的不同形式 | 第32-33页 |
3 蛋白质组学研究前景和展望 | 第33页 |
4 盐芥研究进展 | 第33-37页 |
·盐芥的生长分布 | 第34-35页 |
·胁迫耐受性 | 第35页 |
·离子运输 | 第35-36页 |
·生物化学方面研究 | 第36页 |
·基因表达 | 第36-37页 |
·基因组工具 | 第37页 |
·国际及国内的主要研究小组的研究 | 第37页 |
·盐芥的不同生态型 | 第37页 |
5 用蛋白质组学研究研究不同生态型差异的可行性 | 第37-38页 |
第二部分 实验论文 | 第38-84页 |
第一章 盐芥 ThTRXh 功能分析 | 第38-62页 |
1 实验材料 | 第38-39页 |
·植物材料 | 第38页 |
·菌种 | 第38页 |
·酶及化学试剂 | 第38页 |
·主要设备 | 第38-39页 |
·软件 | 第39页 |
2 实验方法 | 第39-48页 |
·大肠杆菌 DH5α感受态细胞的制备和转化 | 第39页 |
·碱裂解法质粒的提取 | 第39-40页 |
·GeneClean 方法从琼脂糖凝胶上回收再扩增cDNA 片段 | 第40页 |
·农杆菌感受态的制备及转化 | 第40页 |
·盐芥硫氧还蛋白h(ThTRX h)cDNA 克隆的分离与测序 | 第40-41页 |
·ThTRXh -GST 融合蛋白原核表达载体的构建 | 第41页 |
·ThTRX h -GST 融合蛋白的表达以及纯化 | 第41-42页 |
·硫氧还蛋白h 活性测定 | 第42页 |
·植物表达载体pROKII-ThTRX h 的构建 | 第42页 |
·植物表达载体的农杆菌转化 | 第42页 |
·农杆菌质粒的提取与鉴定 | 第42页 |
·渗透法转化拟南芥 | 第42-43页 |
·转化子的筛选及遗传分析 | 第43-44页 |
·CTAB 法微量提取植物基因组DNA 用于pcr 检测 | 第44页 |
·异硫氰酸胍法大量提取盐芥叶片总 RNA 用于 Northern 杂交 | 第44-45页 |
·Northern 杂交分析 | 第45-46页 |
·过量表达盐芥 ThTRX h 基因拟南芥的生理检测 | 第46页 |
·基因沉默表达载体的构建 | 第46-47页 |
·农杆菌转化及渗透法转化盐芥 | 第47页 |
·盐芥转化子的筛选 | 第47-48页 |
3 实验结果及分析 | 第48-59页 |
·盐芥硫氧还蛋白h(ThTRX h)cDNA 序列及分析 | 第48-50页 |
·不同胁迫处理对盐芥硫氧还蛋白h(ThTRX h)基因表达的影响 | 第50-51页 |
·ThTRX h-GST 融合蛋白原核表达载体的构建 | 第51页 |
·融合蛋白的表达、纯化及活性测定 | 第51-53页 |
·转基因拟南芥表型分析 | 第53-59页 |
4 讨论 | 第59-62页 |
第二章 盐芥不同生态型的比较蛋白质组学初步研究 | 第62-84页 |
1 实验材料 | 第62-63页 |
·植物材料 | 第62页 |
·化学试剂 | 第62页 |
·主要设备 | 第62-63页 |
2 实验方法 | 第63-67页 |
·材料的培养 | 第63页 |
·样品的提取 | 第63-64页 |
·植物蛋白质的提取 | 第63页 |
·植物蛋白质的裂解 | 第63-64页 |
·蛋白质浓度的定量 | 第64页 |
·样品水化等电聚焦 | 第64-65页 |
·IPG 胶条的平衡 | 第65-66页 |
·第二向垂直SDS-PAGE电泳 | 第66-67页 |
·染色 | 第67页 |
·图像采集 | 第67页 |
·图像分析 | 第67页 |
·差异蛋白点的胶内酶解回收 | 第67页 |
·差异蛋白点的质谱鉴定 | 第67页 |
·质谱鉴定结果分析 | 第67页 |
3 实验结果 | 第67-81页 |
·实验材料生长情况 | 第67-68页 |
·一维 SDS-PAGE 蛋白电泳结果 | 第68页 |
·PH4-7,7cm 2-D 凝胶图(IEF/SDS-PAGE) | 第68-69页 |
·PH3-10,24cm 2-D 凝胶图(IEF/SDS-PAGE) | 第69-70页 |
·PH4-7,24cm 2-D凝胶图(IEF/SDS-PAGE) | 第70页 |
·差异点质谱鉴定结果 | 第70-77页 |
·BSA的质谱鉴定情况 | 第77-81页 |
4 讨论 | 第81-84页 |
附录 | 第84-86页 |
参考文献 | 第86-99页 |
盐芥ThTRXh功能分析参考文献 | 第86-91页 |
盐芥不同生态型的比较蛋白质组学初步研究参考文献 | 第91-99页 |
致谢 | 第99页 |