| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-12页 |
| ·利用酵母生产甘油 | 第9-10页 |
| ·利用大肠杆菌生产甘油 | 第10-12页 |
| 第二章 含3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)和3-磷酸甘油酯酶基因(hor2)双表达盒的质粒的构建 | 第12-40页 |
| ·材料 | 第12-13页 |
| ·菌株与质粒 | 第12页 |
| ·酶与试剂 | 第12-13页 |
| ·主要仪器设备 | 第13页 |
| ·方法与步骤 | 第13-19页 |
| ·酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae的复苏培养 | 第13页 |
| ·酿酒酵母菌种的保存 | 第13-14页 |
| ·酿酒酵母染色体DNA的制备 | 第14页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)和3-磷酸甘油酯酶基因(hor2)的引物设计和PCR扩增 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第15页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第15-16页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第16页 |
| ·DNA的酶切与连接 | 第16页 |
| ·连接产物化学转化大肠杆菌感受态细胞 | 第16页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第16-17页 |
| ·多克隆位点的缺失 | 第17页 |
| ·gpd1基因的表达盒的PCR扩增 | 第17-18页 |
| ·hor2基因的表达盒的PCR扩增 | 第18页 |
| ·外源片段在大肠杆菌中的诱导表达 | 第18-19页 |
| ·表达产物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第19页 |
| ·含双表达盒的重组大肠杆菌JM109摇瓶发酵实验 | 第19页 |
| ·结果与分析 | 第19-38页 |
| ·S.cerevisiae总DNA的制备 | 第19-20页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)表达质粒的构建 | 第20-25页 |
| ·gpd1基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·pGEM-gpd1重组质粒的酶切验证 | 第21-22页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)的不完全序列分析 | 第22-23页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)与表达载体pSE380的连接 | 第23-24页 |
| ·目的片段的插入方向的确定 | 第24页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第24-25页 |
| ·3-磷酸甘油酯酶基因(hor2)表达质粒的构建 | 第25-30页 |
| ·hor2基因的克隆 | 第26页 |
| ·pGEM-hor2重组质粒的验证 | 第26-27页 |
| ·hor2基因的序列分析 | 第27-28页 |
| ·3-磷酸甘油酯酶基因(hor2)与表达载体pSE380的连接 | 第28页 |
| ·目的片段的插入方向的确定 | 第28-29页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第29-30页 |
| ·含两个表达盒的质粒的构建 | 第30-37页 |
| ·多克隆位点的缺失 | 第31-32页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第32-34页 |
| ·含gpd1基因的表达盒的克隆 | 第34页 |
| ·gpd1基因的表达盒与质粒pGEM-3zf(+)的连接 | 第34-35页 |
| ·含hor2基因的表达盒的克隆 | 第35页 |
| ·含两个表达盒表达质粒的构建 | 第35-36页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·含双表达盒的重组大肠杆菌JM109摇瓶发酵实验 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 含3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)和3-磷酸甘油酯酶基因(hor2)多顺反子的表达质粒的构建 | 第40-50页 |
| ·材料 | 第40页 |
| ·方法与步骤 | 第40-42页 |
| ·3-磷酸甘油脱氢酶基因(gpd1)的引物设计和PCR扩增 | 第40-41页 |
| ·3-磷酸甘油酯酶基因(hor2)的引物设计和PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·DNA的酶切 | 第42页 |
| ·DNA的连接与转化 | 第42页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第42页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第42页 |
| ·蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第42页 |
| ·含多顺反子的重组大肠杆菌JM109摇瓶发酵实验 | 第42页 |
| ·含多顺反子的重组大肠杆菌BL21发酵罐发酵实验 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-48页 |
| ·gpd1基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·hor2基因的克隆 | 第43页 |
| ·含多顺反子的表达质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第44-46页 |
| ·含多顺反子的重组大肠杆菌JM109摇瓶发酵实验 | 第46页 |
| ·含多顺反子的重组大肠杆菌BL21发酵罐发酵实验 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 结论与展望 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 附录 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第60页 |
