| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| ·大环内酯类抗生素概述 | 第13-19页 |
| ·红霉素理化性质和结构特点 | 第13-14页 |
| ·抗菌活性及临床应用 | 第14-15页 |
| ·生物合成途径 | 第15-19页 |
| ·大环内酯环的合成 | 第15-16页 |
| ·对大环内酯环的结构修饰 | 第16-17页 |
| ·红霉素生物合成的基因学 | 第17-19页 |
| ·红霉素结构改造 | 第19页 |
| ·C6位羟基的修饰 | 第19页 |
| ·C9位羰基的修饰 | 第19页 |
| ·链霉菌中基因敲除和基因置换 | 第19-20页 |
| ·同源重组单交换法 | 第19-20页 |
| ·同源重组双交换插入失活 | 第20页 |
| ·框架内删除使目的基因失活 | 第20页 |
| ·插入点突变 | 第20页 |
| ·用于基因阻断的载体的选择 | 第20-21页 |
| ·非复制型大肠杆菌质粒(自杀质粒) | 第20页 |
| ·复制型温敏载体 | 第20页 |
| ·复制型非温敏载体 | 第20-21页 |
| ·噬菌体衍生载体 | 第21页 |
| ·整合型载体 | 第21页 |
| ·链霉菌转移系统 | 第21-22页 |
| ·PEG-介导的质粒转化原生质体 | 第21页 |
| ·电转化 | 第21-22页 |
| ·接合转移 | 第22页 |
| ·本论文立题意义 | 第22-24页 |
| 第二章 材料与方法 | 第24-35页 |
| ·实验材料 | 第24-29页 |
| ·菌种与质粒 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-26页 |
| ·缓冲液 | 第26页 |
| ·试剂 | 第26-27页 |
| ·实验仪器 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·菌种的培养和保藏 | 第29页 |
| ·出发菌株自然分离 | 第29页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第29页 |
| ·链霉菌质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·链霉菌总DNA的提取 | 第30页 |
| ·重组质粒的快速鉴定 | 第30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| ·质粒DNA转化大肠杆菌 | 第31页 |
| ·DNA酶切和连接 | 第31页 |
| ·DNA电泳和片段回收 | 第31-32页 |
| ·接合转移试验 | 第32页 |
| ·红霉素发酵工艺 | 第32页 |
| ·生物效价测定一剂量(纸片法) | 第32-33页 |
| ·发酵液中红霉素的提取 | 第33页 |
| ·TLC薄层层析法 | 第33-34页 |
| ·抗生素组分生物显影 | 第34页 |
| ·薄层刮板 | 第34-35页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第35-56页 |
| ·糖多孢红霉菌出发菌株的自然选育 | 第35页 |
| ·接合转移载体的选择及△eryF基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·△eryF基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·引物设计 | 第37页 |
| ·以pHZ132为载体阻断质粒pSPU261的构建 | 第37-41页 |
| ·质粒pSPU261的构建 | 第37-38页 |
| ·质粒pSPU261的酶切鉴定 | 第38-40页 |
| ·接合转移 | 第40-41页 |
| ·以pSET152为载体阻断质粒pSPU263的构建及阻断菌株的筛选和坚定 | 第41-56页 |
| ·pSET152的选择 | 第41-42页 |
| ·质粒pSPU202测序分析 | 第42-43页 |
| ·质粒pSPU263的构建 | 第43页 |
| ·质粒pSPU263的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·接合转移 | 第44-45页 |
| ·单交换菌株的鉴定 | 第45-47页 |
| ·双交换菌株的筛选 | 第47-48页 |
| ·双交换菌株酶切验证 | 第48页 |
| ·双交换菌株测序分析 | 第48-51页 |
| ·F3-1110双交换阻断菌株发酵生物效价 | 第51页 |
| ·F3-1110双交换阻断菌株发酵组分TLC分析 | 第51-52页 |
| ·F3-1110双交换阻断菌株发酵组分质谱(MS)分析 | 第52-56页 |
| 第四章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
