| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-23页 |
| 1.氨基糖昔类抗生素应用中的问题 | 第13-15页 |
| 2.氨基糖普类抗生素的化学结构改造 | 第15-16页 |
| 3.氨基糖普类抗生素生物学方面的研究进展 | 第16-20页 |
| 4.链霉菌抗生素生物合成基因功能的研究 | 第20-21页 |
| 5.研究妥布霉素生物合成基因簇中tacB基因的立题方向 | 第21-23页 |
| 实验材料 | 第23-27页 |
| 1.菌种 | 第23页 |
| 2.质粒 | 第23页 |
| 3.试剂 | 第23-24页 |
| 4.缓冲液 | 第24页 |
| 5.培养基 | 第24-25页 |
| 6.仪器 | 第25-27页 |
| 实验方法 | 第27-32页 |
| 1.大肠杆菌质粒DNA小量提取 | 第27页 |
| 2.大肠杆菌质粒DNA大量提取 | 第27页 |
| 3.链霉菌质粒DNA的提取 | 第27页 |
| 4.链霉菌总DNA的提取 | 第27-28页 |
| 5.大肠杆菌DH-5α感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 6.质粒DNA转化大肠杆菌 | 第28页 |
| 7.DNA酶切和连接 | 第28页 |
| 8.DNA电泳和片断回收 | 第28-29页 |
| 9.PCR反应 | 第29页 |
| 10.接合转移试验 | 第29-30页 |
| 11.黑暗链霉菌发酵及检测操作的实验方法 | 第30页 |
| ·发酵流程 | 第30页 |
| ·抗生素组分检测 | 第30页 |
| 12.抗生素的提取与纯化 | 第30-31页 |
| ·发酵液的预处理 | 第30页 |
| ·样品的提取 | 第30-31页 |
| 13.HPLC-ELSD分析 | 第31-32页 |
| 结果与讨论 | 第32-51页 |
| 第一部分 tacB阻断株的获得及发酵组分分析 | 第32-40页 |
| 1.阻断载体的构建 | 第32-35页 |
| ·PCR扩增完整的tacB基因及上下游序列 | 第32-33页 |
| ·质粒pSPU501的构建 | 第33页 |
| ·质粒pSPU502的构建 | 第33页 |
| ·质粒pSPU503构建 | 第33页 |
| ·质粒pHZ132-△tacB的构建 | 第33-35页 |
| ·质粒pHZ132-△tacB的酶切验证 | 第35页 |
| 2.接合转移实验 | 第35页 |
| 3.单交换基因阻断菌株的获得 | 第35-36页 |
| 4.基因阻断菌株体内游离质粒的考察 | 第36页 |
| 5.双交换基因阻断菌株的获得 | 第36-37页 |
| 6.阻断株S.tenebrarius tacB~-发酵组分分析 | 第37-38页 |
| 7.讨论 | 第38-40页 |
| 第二部分 阻断株S.tenebrarius tacB~-产生的新组分的分离、纯化与结构确定 | 第40-43页 |
| 1.新组分的分离纯化 | 第40页 |
| 2.新组分的MS分析 | 第40-41页 |
| 3.新组分的NMR分析 | 第41页 |
| 4.讨论 | 第41-43页 |
| 第三部分 阻断株S.tenebrarius tacB~-的互补实验 | 第43-51页 |
| 1.互补质粒的构建 | 第43-46页 |
| ·PCR扩增获得完整的tacB基因 | 第43页 |
| ·质粒pSPU508的构建 | 第43页 |
| ·质粒pSPU509的构建 | 第43-44页 |
| ·质粒pSPU510的构建 | 第44页 |
| ·质粒pSET152-tacB的构建 | 第44页 |
| ·质粒pSET152-tacB的酶切验证 | 第44-46页 |
| 2.接合转移实验 | 第46-47页 |
| 3.接合子分子水平验证 | 第47页 |
| 4.接合子的发酵组分分析 | 第47页 |
| 5.S.tenebrarius tacB~--tacB发酵产物的提取及HPLC-ELSD检测 | 第47-48页 |
| 6.讨论 | 第48-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 发表文章目录 | 第58页 |
